Anti-CD11b antibody [EP1345Y] (ab52478)

Dear Madam/Sir,

Our research group is trying to acquire an antibody against CD11b. We are having trouble to find an antibody made in rabbit that reacts on rat. Do you think the following product will work for us?
Anti-CD11b antibody [EP1345Y] (ab52478)

If so I would like to request a free sample to test it.
Thank you.
Best regards,

ANSWER:

Thank you for your enquiry and your interest in our products.

I can confirm that this antibody (ab52478: Anti-CD11b antibody [EP1345Y]) is raised in rabbit; it has been tested for cross-reactivity only with mouse and human CD11b. It has not been tested with rat samples so it is unknown if ab52478 recognizes rat CD11b.

I have conducted a search for you and found 9 antibodies against CD11b which recognizes rat protein. All of them (ab8879, ab78457, ab75476, ab33838, ab1211, ab33827, ab112239, ab112170) have been raised in mouse. Currently, we do not sell rabbit antibodies against rat CD11b.

If you need any further assistance in the future, please do not hesitate to contact me.

j'aimerais savoir si vous avez réalisé denouveaux tests avec votre anticorps ab 62817 sur des souris.
En effet cet anticorps m'intéresse mais je voudrais m'assurer qu'ilréagit correctement, car je suis déjà en possession de deux anticorps
microgliaux qui ne fonctionnent pas sur mes coupes cryocongelées.
Pourriez-vous également me faire un devis pour l'anticorps suivant :
ab 52478, s'il vous plaît?
Au cas où votre premier anticorps ne soit pas testé sur des souris, jechoisirai celui-là.
Dans le cas où l'anticorps que j'ai cité en premier ne serait pastesté sur des souris, serait-il envisageable de m'en faire parvenir un
échantillon afin que je mène à bien ce test ?
Merci.

ANSWER:

Merci de votre intérêt pour les anti-CD11b d'Abcam.

Anotre connaissance :
1) l'anticorps ab62817n’a pas encore été testéchez la souris (90% d'homologie entre l'immunogène et le CD11b de la souris)mais il a été testé en IHC-Fr,
2) l'anticorps ab52478 n’a pas encore été testéen IHC-Frmais il a été testé chez la souris,

Notre catalogue contenant plus de 70 000 références nous ne pouvons malheureusement pas offrir, pour des raisons logistiques et de stockage, d'échantillon gratuit ou de petit volume pour des essais préliminaires.

Si vous désirez tester un de ces 2anticorps, ab62817 chez la souris ou ab52478 en IHC-Fr,nous pouvons vous offrir une offre de test.Après soumission d’une Abreview avec vos résultats, vous pourrez commander gratuitement un anticorps primaire de notre catalogue.

Etapes à suivre :

1. Nous confirmer que vous souhaiteriez testerab62817et/ou ab52478afin de recevoir le code de remise correspondant. Ce code doit être édité avant l’achat de l'anticorps à tester

2. Acheter ab62817 et/ou ab52478 par téléphone, fax ou internet (www.abcam.com)

3. Le ou lestester (souris / IHC-Fr)

4. Nous faire part de vos résultats, positifs ou négatifs, grâce à notre système Abreview. Pour plus d’informations http://www.abcam.com/abreviews

5. Après soumission de votre Abreview, appeler notre service clientèle afin de passer votre prochaine commande grâce au code de réduction. Ce code de réduction est utilisable 120 jours après son édition et utilisable lors de l’achat d’un autre anticorps primaire.
Même si ab62817 et/ou ab52478 nefonctionnent pas chez la souris ou en IHC-Fr, après soumission de votre Abreview, vous recevrez quand même un anticorps gratuitsur votre prochaine commande.

N’hésitez pas à nous demander plus d’informations concernant cette offre promotionnelle.

Termes et Conditions : www.abcam.com/collaborationdiscount.

Getting good staining in human IHC-P but no staining in mouse tissue

ANSWER:

Thank you for contacting Abcam.

I am sorry about the problems you were having with ab52478 in mouse tissue. As we discussed on the phone I am sending you ab75476 as a free of charge replacement and your new order number is 1046783.

Please let me know if there is anything else I can help you with.

Buenas tardes Ariana,
te adjunto los tres informes sobre los anticuerpos que hemos ido probado frente a CD11b y que no han funcionado satisfactoriamente.
No dudes en contactarme por cualquier duda que valga la pena resolver. Por otro lado, a ver si podemos probar lo antes posible ya sea otra alícuota del antiguo CD11b Ab75476 Lot:XXXX preferentemente (esta nos funcionaba fenomenal como verás en la imagen adjunta), o una alícuota del nuevo lote que me dijiste que estaba disponible.
Seguimos en contacto.
Un saludo y muchas gracias,

ANSWER:

Te agradezco muchísimo que nos hayas enviado los cuestionarios rellenos y las imágenes de los blots. Atendiendo a los mismos, hay una serie de sugerencias /anotaciones que me gustaría haceros, en un intento por mejorar los resultados obtenidos con el anticuerpo:
No mencionas el Buffer usado para llevar a cabo el lisado celular. Nosotros solemos recomendar utilizar RIPA como buffer de lisis, por tener un mayor poder desnaturalizante que otros buffers. Igualmente, para favorecer la reducción y desnaturalización de la proteína, se recomienda calentar a 95C durante al menos 5 minutos usando un agente reductor, como SDS o BME.
¿Habéis probado a bloquear con otras soluciones? Quizás los resultados mejoren al bloquear con BSA al 5%, al ser menos fuerte que la leche es posible que permita visualizar la banda de interés.
Respecto al tiempo de incubación del primario, yo recomendaría dejarlo durante la noche en lugar de incubar dos horas.
Supongo que es obvio, pero es importante asegurarse que el secundario funciona correctamente, y la enzima conjugada se conserva en perfecto estado. Para ello lo mejor es chequearlo usando con otro primario que se sepa que funciona perfectamente.
También es recomendable utilizar un control positivo, que siempre da muchas pistas sobre el origen del problema. Para CD11 se sugiere un lisado de TF1.
Por último, simplemente asegurarse de que no se utiliza ningún agente permeabilizante en el proceso de tratamiento de muestra, pues al ser una proteína de membrana, destruiría la misma impidiendo visualizar la proteína.
Muchas de estas sugerencias os resultarán evidentes, pero en ocasiones el problema puede proceder de cosas tan tontas como que el pHmetro no estaba calibrado y el pH del buffer no era el adecuado, o el sustrato enzimático se había degradado, o ¡incluso un cambio de agua puede variar totalmente los resultados!
Es difícil determinar cuál puede ser el problema por el que no observáis bandas con estos anticuerpos siendo que un lote anterior os funcionó. Además, como te dije por teléfono no son anticuerpos de los que tengamos un especial número de quejas reportadas.
En cualquier caso, te envío de forma gratuita el nuevo lote del anticuerpo ab75476, confiando que este por fin os de los resultados esperados. Recibiréis una confirmación automática del pedido.
Si necesitáis cualquier otra información no dudéis en contactarnos de nuevo.
Mucha suerte con los nuevos experimentos, espero vuestros comentarios al respecto.

Dear Sir and Madam,

we ordered a Anti-CD11b antibody (ab75476) from your company with PO Number 27012012 that was supposed to react with mouse. Thus, we would like to to get a free replacement vial of CD11b antibody (ab75476) according to your offer.
Thank you very much for your help.

ANSWER:

Thank you for your email.

I am in the process of arranging the free replacement antibody you requested. I will let you know the order reference number for this replacement order as soon as it is arranged.

Please let me know if you have any further questions.