Donkey polyclonal Secondary Antibody to Rabbit IgG - H&L (AP), pre-adsorbed (ab7084)

ich bin an einer immunohistochemischen Färbung von humanem CD8 und humanem FoxP3 (in Mausgewebe) interessiert.



- Idealerweise mit einen rabbit anti CD-8 Primärantikörper

- Und FoxP3 mit Alkalischer Phosphatase (o.a.) gelabeltem Sekundärantikörper, um ggf. später ein doublestaining zu machen



Dazu hätte ich zwei Fragen: Welcher Unterschied besteht zwischen Antikörpern aus Überstanden bzw. aufgereinigten Antikörpern? Gibt es spezielle Vor-oder Nachteile bei den jeweiligen Methoden?



Würden Sie mir bitte ein Angebot mit jeweils passenden Sekundärantikörper machen?

ANSWER:

Vielen Dank für Ihre Anfrage.

Ich habe Ihnen hier vier Antikörper herausgesucht, die wenig bzw. gar keine Kreuzreaktion mit dem Maus-Protein aufweisen, so dass Sie nur das humane Protein im Mausgewebe detektieren sollten.

Drei der vier Antikörper stammen aus dem Kaninchen, falls Sie also eine Doppelfärbung durchführen möchten, wurde ich Vorschlagen, einen der Rabbit Antikörper mit einem ungelabelten Sekundär- Antikörper zu blockieren, und dann den sekundären Antikörper mit einem tertiären Antikörper nachzuweisen: zb. im Falle der Kombination aus ab93278 und ab10563.

Dazu passen wuerden dann die folgenden Antikörper: ab6831 Chicken polyclonal Secondary Antibody to Rabbit IgG - H&L gefolgt von ab97142 Goat polyclonal Secondary Antibody to Chicken IgY - H&L (Alkaline Phosphatase), pre-adsorbed ; und ab7084 Donkey polyclonal Secondary Antibody to Rabbit IgG - H&L (AP), pre-adsorbed.

Oder aber Sie benutzen zwei primäre Antikörper aus zwei verschiedenen Species (ab2481 und ab4055).

Als Sekundär- Antikoerper kommen dann ab7084 Donkey polyclonal Secondary Antibody to Rabbit IgG - H&L (AP), pre-adsorbed; und ab6886 Donkey anti-Goat IgG H&L (AP) secondary antibody.

Bezüglich Ihrer Frage nach dem Aufreinigungsgrad: Der einzige Vorteil eines aufgereinigten Antikörpers ist es, dass Sie eine Isotopenkontrolle berechnen können, da Sie genau wissen, wie viel Antikörper Sie einsetzen. Dies ist aber eigentlich nur in der Flow Zytometrie von Interesse.


Ich hoffe, dies hilft Ihnen weiter. Bitte zögern Sie nicht, sich wieder bei uns zu melden, falls Sie weitere Fragen haben.

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Customer would like to know the crossreactivity of these two antibodies with human IgG? The datasheet states taht there is a minimum cross-reaction. Can you provide some data? % of cross-reaction? He is looking for a secondary antibody which does not cross-react with human IgG at all.

ANSWER:

Thank you for your phone call regarding cross-reactivity of ab7084 and ab7062.

We have just received some more information and would like to pass it onto you:

Our QC criteria are less than 1% cross-reactivity to those minimized serum proteins when the titer gives 0.5 OD to its own antigen. For example if 1:20,000 dilution of 610-705-124 showed 0.5 OD when it reacts with Mouse IgG. Then its cross reactivity to Human IgG at 1:20,000 has to be less than 0.005 OD.

If you are looking for more specific secondary antibodies, we would perhaps suggest looking at the datasheets of the following products. These do NOT cross-react with human IgG.

Anti-mouse-ALP: ab5871, ab5880, ab5888;

Anti-rabbit-ALP: ab6121, ab6251, ab6258, ab6518.

We hope this information will be useful for you. If you need anything further or any help then please let us know.