Anti-JAK2 (phospho Y1007 + Y1008) antibody [E132] (ab32101)

I am very interested in purchasing JAK2 (phospho Y1007 + Y1008)
antibody [E132] (ab32101) , but I would know whic positive control
(name of cell line, type and time of treatment) is used in western
blot image and moreover if this lysate is available by abcam,

thanks.

ANSWER:

Thank you for your enquiry.

I can confirm that this antibody has been tested on the following and these would be suitable positive controls:

Rat uterine cell line Treated with 1µg/mL Prolactin for 1 hour.

Jurkat cell lysate treated with GM-CSF (Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor) or Pervanadate

I am sorry we do not provide lysates of these cell lines that have beenpre treated. Unfortunately, we did not test any cell lines that do not require pretreatment. I was not able to find positive controls for phosphorylated Jak2 in the literature, and from what I find stimulation is required for expression of this phosphorylated state of the protein in cell culture.

I can suggest to do a further literature search for more information.

I am sorry we have not suitable positive controls to provide from our catalog on this occasion, however I hope this information is useful to you. If you have any further questions, please do not hesitate to contact me.

Haben Sie Erfahrungen zur Verwendung dieses AKs an Gefrierschnitten?

ANSWER:

Vielen Dank für Ihren Anruf und für Ihr Interesse an unseren Produkten.

Gerne versichere ich Ihnen, dass alle unsere Produkte unsere Abcam Garantier unterliegen: Falls sich herausstellt, dass der Antikörper nicht so funktioniert, wie auf dem Datenblatt beschrieben und Sie sich innerhalb von sechs Monaten mit Ihrem Problem an uns wenden, werden wir Ihnen gerne Vorschläge zur Optimierung Ihres Protokolls oder gegebenenfalls einen Ersatz oder eine Gutschrift schicken.

Wie am Telefon besprochen haben wir noch keine Abbildung von dem Antikörper ab32101 in der Immunhistochemie an Gefrierschnitten (IHC-Fr). Falls Sie uns eine Abbildung Ihrer Ergebnisse mit ab32101 zukommen lassen, kann ich Ihnen zurzeit ein spezielles Angebot über einen 100%igen Abreview-Rabatt anbieten. Bei diesem Angebot bekommen Sie einen Rabatt für eine zukünftige Bestellung, wenn Sie uns ein Abreview mit dem Testresultat und einer Abbildung zusenden. Der 100%ige Rabatt würde gegen eine erneute Bestellung eines primären Antikörpers von uns verrechnet werden.

Um von diesem Angebot profitieren zu können, folgen Sie bitte diesen Schritten:

1.) Bestätigen Sie mir bitte, dass Sie ab32101 kaufen möchten und bereit sind uns eine Abbildung Ihrer Ergebnisse zukommen zu lassen.

2.) Bitte bestellen Sie erst nach Erhalt des Rabattcodes.

3.) Bestellen Sie den Antikörper wie üblich per Telefon, Email oder Fax

4.) Testen Sie den Antikörper in der IHC-Fr.

5.) Senden Sie uns die Abbildung Ihres Ergebnisses mittels eines Abreviews zu und notieren Sie den Discount Code in dem Feld "additional notes" Unter der folgenden URL können Sie mehr über unser Abreview System erfahren: http://www.abcam.com/abreviews

6.) Der Rabattcode ist nach dem Abschicken des Abreviews aktiv, und Sie können einen anderen primären Antikörper bei uns bestellen (halten Sie bei der Bestellung bitte den Rabattcode und die Bestellnummer bereit). Bitte beachten Sie, dass der Rabattcode innerhalb von 4 Monaten nach Ausstellung eingelöst werden muss.

Der Rabattcode wird gültig unabhängig davon, ob Ihr Ergebnis positiv oder negativ ist.

Die Bedingungen zu unserem 100% Abreview Rabatt können Sie unter dem folgenden Link nachlesen: http://www.abcam.com/collaborationdiscount

Ich hoffe, diese Informationen helfen Ihnen weiter. Falls Sie einen Rabattcode erhalten möchten oder weitere Fragen haben, zögern Sie bitte nicht, sich wieder an mich zu wenden.

I have a question regarding the treatment of tissue prior to applying the primary antibody. Do you recommend microwave? Enzymatic?

The tissue I have in mind is human salivary gland.

I'm planning to use ab6672, ab59389, ab39636, ab32101, ab31370 and ab30646. Different recommendations?

ANSWER:

Thank you for contacting us.

The treatment of PFA-fixed, paraffin embedded sections (IHC-P) before incubation with priamry antibody would include antigen retrieval, blocking of endogenous peroxidases (if HRP is being used for detection), and blocking of non-specific proteins. Here are the protocol details for the respective antibodies:

ab30646, ab31370, ab39636, ab59389:

1. antigen retrieval: 10 mM citrate buffer (pH6.0) boil in pressure cooker

2. block with 3% H2O2 (in fresh methanol) for 15 minutes at room temperature

3. block with 3% BSA in TBS for 30 minutes

ab6672:

antigen retrieval: citrate buffer pH 6 and proteinase K digestion have been tried successfully as well as no antigen retrieval.

2. block with 3% hydrogen peroxide for 10 min

3. block with 1-10% Serum for up to 1 hour

ab32101:

1. antigen retrieval:10 mM Sodium Citrate Buffer, pH 6.0 in rice cooker

2. block with 3% hydrogen peroxide for 10 min

3. block with PBS + 10% serum

I hope this information is helpful to you. Please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.

Dear Sirs, I am potentially very interested in purchasing this mAb but I would like first to know: 1) whether this mAb is specific for the Y1007-Y1008 phosphorylated form of JAK2 or also detects the non-phosphorylated form (could you please provide a western blot, as the one shown in the website is not informative in this regard?) 2) whether you had the chance to test this mAb also on formalin-fixed paraffin-embedded decalcified bone marrow biopsies; in fact, the additional decalcification step required by bone material often denatures epitopes otherwise resistant to formalin fixation and paraffin embedding 3) which tissues can be used as positive controls, besides lung adenocarcinoma 4) what is the frequency of positivity of lung adenocarcinoma ?

ANSWER:

Thank you for contacting us. In answer to your questions:

1. The antibody ab32101 is specific to the phosphorylated protein. We do not have another Western blot but we are confident, given the dot blot result, that this antibody will not recognize unphosphorylated JAK2.

2. We have not tested the antibody on bone marrow but our Abpromise guarantee covers this application.

3. Any carcinoma should serve well as a positive control: colon, breast, renal.

4. We do not know how often lung adenocarcinoma tissue reacts positively with this antibody.

I hope this information helps. Please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.