Anti-KCNH5 antibody (ab86216)

Ich habe die vier KCNH1- und die zwei KCNH5-Antikörper getestet. Ich habe leider keine gute Ergebnisse. Die beide KCNH5 Antikörper sind nicht spezifisch. KCNH5 hat eine 75% homologie zu KCNH1. Ich habe eine Signal sowohl in KCNH5-HEK- als auch KCNH1-HEK und WT-HEK-Zellen bekommen. Das ist relativ einfach bei “Additional Notes” zu kommentieren (hoffe ich, da ich es noch nicht gemacht habe). Wo ich ein Problem habe, ist bei der vier KCNH1 Antikörper. Bei diesen Antikörper habe ich das perfekte negativ Kontrolle, ein KCNH1 Knockout Maus. Die Knockout Maus wurde schon mit einen nicht kommerzielle Antikörper (im Haus gemacht) mit Western Blot getestet und verifiziert, dass es keine KCNH1 Protein Expression gibt. Als ich das Western Blot durchgeführt habe, hat nur den Antikörper AB101174 gut ausgesehen. Die andere drei KCNH1 Antikörper hatten eine Bande bei der Knockout Maus. Letzt endlich möchte ich ein Antikörper für Immunhistochemie benutzen. Leider gibt den AB101174 auch eine Signal in Vibratome-Schnitte der Knockout Maus. Wie soll ich alles bei der “Additional Notes” schreiben, da die Charakterisierung der Knockout Maus noch nicht publiziert ist. Gibt es noch andere Möglichkeit um Discount Codes zu benutzen. Wenn Sie möchten kann ich Bilder Ihnen senden.

ANSWER:

Vielen Dank für diese Rückmeldung. Es tut mir wirklich sehr leid, dass Sie keine zufriedenstellenden Ergebnisse erhalten haben! Zu den KCNH5-Antikörpern: Es ist in der Tat sehr einfach, in den 'Additional Notes' eine kurze Notiz zu den erzielten Ergebnissen zu machen – die Box finden Sie ganz unten im Onlineformular. Es tut mir leid, dass die beiden Antikörper nicht spezifisch für KCNH5 zu sein scheinen, sondern offenbar auch KCNH1 detektieren. Ich habe die Immunogensequenzen geblastet, und zumindest die für ab32975 zeigt eine Ähnlichkeit von 84% gegen KCNH1, so dass eine Kreuzreaktivität in der Tat nicht ausgeschlossen werden kann. Allerdings überrascht es mich, dass ab86216 mit einer Sequenzähnlichkeit von nur 34% gegen KCNH1 auch ein Signal ergibt. Welche Negativkontrolle hatten Sie denn mitgeführt? Ich bin wirklich gespannt, Ihre Abreviews in den HEK-Zellen zu sehen! (Dafür werden Sie auf jeden Fall eine Menge Abpoints erhalten, sobald unser Abreviewteam die Abreviews angesehen hat!) Hatten Sie die beiden Antikörper denn auch mit Mausproben getestet? Dafür hatte ich Ihnen ja die Rabattcodes ausgestellt. Denn wenn Sie zusaetzlich noch Abreviews über den Test in Maus einreichen, erhalten Sie nicht nur die normalen Abpoints, sondern auch jeweils den kostenlosen Antikörper aus dem Rabattprogramm. Zu den KCNH1-Antikörpern: Es tut mir leid zu hören, dass keiner der vier Antikörper für Sie geeignet scheint! Natürlich werden Sie die kostenlosen Antikörper aus dem Testprogramm erhalten, sobald wir Ihre Abreviews angeschaut haben und es sich herausstellt, dass sie nicht für die Maus (bzw. die IHC) geeignet sind. Um die Rabattcode freizuschalten, wird unser Abreviewteam sicherlich noch einige Informationen erfragen, und um Ihnen die doppelte Mühe zu ersparen, möchte ich dies gerne schon einmal mit Ihnen klären: 1) Darf ich fragen, wie die Antikörper in Westernblots für humane Proben (zum Beispiel die KCNH1-HEK-Zellen) bzw. in einer Positivkontrolle (zum Beispiel wt-Maus) aussehen? Gerade für ab101174 wäre dies die Kontrolle, die zeigt, dass der Antikörper wie auf dem Datenblatt angegeben (d.h. gegen human, im Western blot) und zusätzlich für die Maus im Westernblot funktioniert, dass er aber nicht in der IHC geeignet ist. Hierzu wäre es hilfreich, wenn Sie mir ein paar Bilder zusenden könnten, vielleicht am besten diejenigen, die Sie auch mit den Abreviews einreichen würden? 2) Gegen welchen Teil von KCNH1 ist Ihr eigener, nicht kommerzieller Antikörper denn gerichtet? Ist er vergleichbar zu einem der vier getesteten, d.h. zum Beispiel gegen den C-Terminus? Dies wäre wichtig, um auszuschließen, dass bei der knockout-Maus auch ein vollständiger knockout vorliegt und kein Fragment von KCNH1 exprimiert wird. Hatten Sie dies auch durch Southernblot oder PCR verifiziert? Ich möchte Ihnen gerne versichern, dass Sie für all Ihre Mühen natürlich entlohnt werden: Für die entsprechenden Abreviews bekommen Sie nicht nur die kostenlosen Antikörper, sondern auch zusätzlich noch die Abpoints (ebenso wie für jeden zusätzlich eingereichten Abreview). Des Weiteren hoffe ich, dass wir für Ihre Versuchsvorhaben geeignete Antikörper finden! Falls sich herausstellt, dass die Antikörper nicht so funktionieren, wie auf dem Datenblatt beschrieben, werden wir Ihnen gerne einen Ersatz oder eine Gutschrift schicken. Ich freue mich auf Ihre Antworten!