Anti-Tenascin C antibody [T2H5] (ab3970)

Hola buenos días,
Estamos usando para westerns blot el anticuerpo Tenascina ab3970 lote XXXX me llegó al laboratorio el 16 abril con el número de pedido XXXX con la referencia XXXXX.
El problema que tenemoses que no nos da señal.
Anteriormente hacíamos servir el lote Tenascina ab3970 lote XXXXXX y no habíamos tenido estos problemas con el control positivo.
Me gustaría saber si habeis tenido alguna incidéncia y asesorarnos.
Saludos cordiales.

ANSWER:

Gracias por contactarnos.

Siento mucho que estéis teniendo problemas con este anticuerpo. He comprobado nuestro registro de reclamaciones de otros clientes, así como los resultados de los controles de calidad realizados, y no parece que haya ninguna anomalía con este producto.

En ocasiones lotes concretos pueden dar resultados más inespecíficos que otros, pero en este caso me sorprende ya que mencionas que el lote anterior (XXXXX) había proporcionado los resultados esperados. En realidad ambos lotes son el mismo, la diferencia (el 1 o el 2 después del guión) es que son diferentes alícuotas del mismo lote.

Si te parece podemos echar un vistazo a los resultados obtenidos, así como al protocolo seguido. Para ello te envío un cuestionario que se rellena en pocos minutos, y que nos resulta muy útil a la hora de entender qué ha podido pasar para que el anticuerpo no se comporte como se espera.

Si nos envías alguna imagen, especialmente comparando ambas alícuotas, te lo agradezco. ¿Habéis usado exactamente los mismos reactivos / membranas / muestras, etc… en ambos ensayos?

De todas maneras, todos los productos tienen una garantía de 6 meses, y si finalmente el problema radicase en el vial enviado, no habrá ningún problema en reemplazarlo o reembolsarlo.

Quedo pues a la espera de tu respuesta para ayudarte a solucionar el problema lo antes posible.

Hola ,
¿Qué tal? estoy interesada en inmunofluorescencia
de doble marcaje en tejidos humanos parafinados.
En concreto me interesarían los anticuerpos primarios, a ser posible
monoclonales, de distintas especies para poder combinarlos, contra las
siguientes proteínas humanas:
* OCT4: ab18976, ab109183, ab129030
* tenascin C: ab6346, ab3970, ab108930, ab86182
* CD68: ab955, ab845, ab125047
* S100A6: ab11181, ab117714, ab75676
* ganglioside GD2: ab68456
* Sox10: ab107532, ab122977
* MMP9: ab76003, ab119906
* CD163: ab111250, ab100909
* PNMT: ab119784
He indicado los productos que me parecían interesantes de la web, pero
acepto sugerencias.
Y tambíen estaría interesada en los anticuerpos secundarios marcados
con distintos fluorocromos para anticuerpos de distintas especies.
Necesitaría la ficha técnica y el precio de cada uno de ellos.
Muchas gracias.
Saludos,

ANSWER:

Muchas gracias por tu respuesta.

Es importante que todos los anticuerpos que escojas para llevar a cabo IHC-P en tejido humano estén validados (y por tanto garantizados por Abcam) para funcionar en esta especie y aplicación. Esta información aparece en la hoja técnica de los productos.

También es importante echar un vistazo a las hojas de datos de cada uno de los productos para tener en cuenta recomendaciones especificas, tales como diluciones, métodos de recuperación antigénica, y demás que pueden aparecer en ellas. A las fichas técnicas se puede acceder desde la página web, escribiendo el código del anticuerpo (ab955, por ejemplo) en la casilla azul en la parte de arriba de nuestra página web (http://www.abcam.com/).

Desconozco las combinaciones que queréis llevar a cabo mediante inmunofluorescencia doble con los anticuerpos mencionados. En general, a la hora de hacer inmunoensayos múltiples hay que tener mucha precaución para evitar reactividad cruzada. Es importante usar anticuerpos procedentes de distintas especies si se puede, o al menos con diferentes isotipos. Una buena forma de evitar reactividad cruzada es usando secundarios de la misma especie. Además esto permite usar suero de dicha especie para bloquear.

Te copio los links a los protocolos que tenemos en nuestra web para llevar a cabo doble inmunofluorescencia por s pudieran resultar de ayuda:

http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11459

http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11458

De todas maneras si quieres que comentemos distintas posibilidades y escenarios posibles, no dudes en contactarme otra vez.

Respecto a los secundarios, tenemos muchos anticuerpos que podrían serviros. Te aconsejo que en función de los primarios y combinaciones que vayáis a llevar a cabo, optéis por uno u otro. Para llevar a cabo la búsqueda de los secundarios desde la pagina web (http://www.abcam.com/) pincha en la pestaña “Secondary Antibodies”. Se abre una nueva ventana de “Advance Search”, en la cual se pueden elegir las categorías requeridas. La única categoría obligatoria es el isotipo del anticuerpo, pues tiene que coincidir con el del primario. El resto de categorías son opcionales, pero son muy útiles para afinar la búsqueda y elegir el anticuerpo más apropiado según la especie del primario, la conjugación deseada, la clonalidad, la aplicación en la que se va a testar, etc…

Los precios y la disponibilidad pueden consultarse igualmente en la parte superior de la datasheet de los productos. Si necesitas un presupuesto no dudes en hacérmelo saber para que te lo envíe. Además tenemos algún descuento para pedidos superiores a 5 productos, por lo que si vais a realizar un pedido de estas características te animaría a que nos contactaras primero.

Espero que esta información sea de ayuda. Como te digo, para cualquier aclaración o más sugerencias, estaré encantada de echar una mano.

ab3970 (Tenascin antibody [T2H5]) ab6393 (Tenascin antibody [BC-24]) ab7839 (Tenascin antibody [B324.1.])

Do these products recognize tenascin C?

ANSWER:

Thank you for your patience.

I have contacted the originators of ab3970, ab6393, and ab7839 and have received the following replies:

ab3970 - This antibody reacts with tenascin; it was raised against mammary tumor of human origin. Tenascin-C could be the alternate name of tenascin: Tenascin-C (Tn) is the best characterized member of the tenascin family of cell-adhesion proteins - Alternate names of tenascin C: tenascin; cytotactin; hexabrachion.

ab6393 - The epitope recognized by this antibody is common to all Tenascin isoforms. Thus, the antibody will recognize Ten-C along with the other isoforms of tenascin.

ab7839 - No reply. I have recontacted them.

I hope this information helps. If I receive additional information on ab7839, I will e-mail it to you.

Please do not hesitate to contact us again if you have additional questions.

The customer is looking for antibodies to use in IHC-P (IF) on chicken embryos against: -tanascin -myosin heavy chain

ANSWER:

Thank you for your recent phone call and your interest in our tenascin and myosin heavy chain antibodies.

As we discussed we do not currently have antibodies which have been tested in chicken tissue and the homology searches revealed that for tenascin there is 64% identity between the human precursor form (immunogen of our tenascin antibodies) and the chicken precursor form. This is not extremely high and therefore our antibodies do not have high chances of cross reacting with chicken tissue. You may find better antibodies for chicken tissue on biocompare.com or at the bottom of the search for tenascin on our website a link to the World's antibody gateway which looks at 149 other online antibody companies.

I am trying to find out more information about the immunogen sequence for the myosin heavy chain antibodies to work out the homology between the immunogen and the chicken protein, my apologies for the delay.

1- Order details Batch numbers: 33084 and 83588  Purchase order numbers: 43035 and 58853 Antibody storage conditions: 2-4 C 2- No staining 3- Human gastroentistinal tract 4- 70% ethanol ( not cold ) 5- Yes, Both; enzymatic method and heat mediated technique 6- I used peroxidase block 5 min. nothing else 7- Mouse,  50,100,200, ChemMate antibody diluent, Different incubation times and temp. e.g. 30 min at room temp, one hour at 37 C, overnight at 2-4 C, Washing with PBS. 8- Peroxidase labeiied polymer conjugated to goat anti-mouse immunoglobulins in Tris-HCL buffer containing stabilizing protein and an anti-microbial agent, incubated for 30 min at RT, then washed with PBS .  All the steps are according to the instruction provided by DakoCytomation 9- Substrate-chromoge(DAB) for 5 min. at RT 12- Tissues with normal and thick basement membrane were used 13- Seven times, No staining of the basement membrane and sometimes with background, Changing the incubation time and temp. and using antigen retrival steps, manual in six times and automatic once I would be grateful if I could send you photos of my staining for your expert assessment Waiting for your expert and valuable opinion

ANSWER:

Thank you for the details of your protocol, my apologies for the delay due to a long bank holiday weekend in the UK. My colleague Tanya is away and I will do my best to help you.

This antibody has been tested in IHC on formalin-fixed paraffin embedded tissue, I would therefore suggest using formalin fixation as it is possible that ethanol fixation is not sufficient to fix the proteins. Please also use PBST with triton to dilute the primary and secondary antibodies.

You may also find the references below useful:

Gulubova M Immunohistochemical localization of collagen type III and type IV, laminin, tenascin and alpha-smooth muscle actin (alphaSMA) in the human liver in peliosis. Pathol Res Pract 198:803-12 (2002). PubMed: 12608657

Ioachim E et al. Immunohistochemical expression of extracellular matrix components tenascin, fibronectin, collagen type IV and laminin in breast cancer: their prognostic value and role in tumour invasion and progression. Eur J Cancer 38:2362-70 (2002). PubMed: 12460779

Faustino AM et al. Tenascin expression in normal, hyperplastic, dysplastic and neoplastic canine mammary tissues. J Comp Pathol 126:1-8 (2002). PubMed: 11814316

Tokes AM et al. Immunohistochemical localisation of tenascin in invasive ductal carcinoma of the breast. Anticancer Res 19:175-9 (1999). PubMed: 10226540

Please do not hesitate to contact us if you still have problems,