Anti-beta Galactosidase antibody (ab616)

Sehr geehrte Damen und Herren,

für unsere Experimente wären sehr an einem funktionierenden ß-Gal AB interresiert. Leider haben wir schon mit über 4 Antikörper von verschiedenen
Herstellern schlechte Erfahrungen gemacht.

Durch folgende Veröffentlichung wurden wir auch Ihren AB aufmerksam:

Sonic Hedgehog Signaling Mediates Epithelial–Mesenchymal Communication and Promotes Renal Fibrosis JASN May 1, 2012 23: 801-813; published ahead of print February 2, 2012, doi:10.1681/ASN.2011060614
Sehr gerne würde wir Ihren Antikörper (ab616) testen, falls dies möglich ist. Könnten Sie uns ein Batch für einige Testfärbungen zur Verfügung stellen?

Mit freundlichen Grüßen,


--

ANSWER:

Vielen Dank für Ihre Anfrage.

Leider bieten wir generell keine kostenlosen Proben zu Testzwecken an. Hier bei Abcam verfahren wir so, dass wir einen kostenlosen Ersatz oder eine Gutschrift verschicken, falls ein Antikörper nicht so funktioniert wie auf unserem Datenblatt beschrieben. Falls der Antikörper in einer bisher nicht getesteten Anwendung oder Spezies verwendet wird, können wir leider keinen Ersatz anbieten, wir möchten Sie jedoch einladen unser Abreview-System zu verwenden.

Das Abreview-System erlaubt es unseren Kunden, Rezensionen unserer Produkte zu veröffendlichen und dafür Punkte zu erhalten. Diese “Abpoints” können gegen Rabatte beim Kauf weiterer Produkte oder Geschenkgutscheine wie z.B. Amazon.com-Gutscheine eingetauscht werden. Sollten Sie sich dazu entscheiden, dieses Produkt zu kaufen, teilen Sie uns bitte Ihre Ergebnisse mittels eines „Abreview“ mit. Sie können die Rezension durch einen Link direkt auf unserem Produktdatenblatt abschicken.

Unter der folgenden URL können Sie mehr über unser Abreview-System zu erfahren:

http://www.abcam.com/abreviews

Ich hoffe, dies hilft Ihnen weiter. Bitte zögern Sie nicht, sich wieder bei uns zu melden, falls Sie weitere Fragen haben.

Bonjour, Monsieur
Pour l'instant, j'essaie juste de faire marcher un contrôle positif: un autre facteur de transcription avec la même colocalisation. Et le marquage ne marche que si je mets du Triton 0.1 dans tous les milieu d'incubation, mais je perd le contre-marquage membrannaire qui me permet d'identifier les cellules d'intérêt. Je suis en train de substituer le triton avec du Tween dans différentes étapes. Quand j'aurai un beau contrôle positif, je re-testerai l'AC d'abcam et vous tiendrai au courrant…. Mais ça risque deprendre un peu de temps.
Merci en tout cas pour votre disponnibilité.
Bien cordialement,

ANSWER:

Merci pour ces précisions.

Je vous souhaite une bonne continuation dans vos expérimentations. N'hésitez pas à nous contacter de nouveau si vous avez des questions.

Bonjour,
Merci pour votre mail : toute aide est la bienvenue !
Pour finir un article concernant l'étude d'un mutant Lyl-1-LacZ, je dois confirmer l'expression de Lyl-1 par un type cellulaire X (macrophages embryonnaires), soit par l'identification de Lyl-1 (transcription factor), soit pas celle de la Beta-Gal.
Les anticorps que je teste à l'heure actuelle sont les suivants :
Anti-Beta-gal : ab9361 (Lot GR 49531-1). J'avais testé précédemment l'anticorps ab 616-1 (lot 95968) et il n'avait pas marché).
Anti-Lyl-1: ab30334 (lot GR 52627-1) (J'avais aussi testé le ab53354, il y a quelques temps, sans succès)
Je travaille sur coupe au cryostat d'embryons de souris. Fixation PAF4%; Perm: PBS1%triton; Blocking; 10%SVF; AC1: 4°C o/n; AC2 (couplé alexa: 1/400); 1h @T°amb. Témoins sans AC1. Je fais des co-marquage avec d'autres AC1 membrannaires Rat anti mouse directement couplés.

Un grand merci d'avances pour toute information sur ces anticorps qui me permettrais de progresser !
Avec mes cordiales salutations,

ANSWER:

Merci d'avoir répondu à notre questionnaire.

J'ai compris que vous étiez actuellement en train d'optimiser votre protocole IHC en appliquant les suggestions que je vous ai fournies.

Comme indiqué précédemment, simes suggestions ne permettent pas d'améliorer vos résultats, n'hésitez pas à me contacteret je vous ferai parvenir une unité de remplacement avec un lot ou une référence différente(par exemple le ab111067 pour l'anti-Lyl1 car il a été testé en IHC-P et il est prédit pour fonctionner chez la souris).

Je serais intéressé par un de vos anticorps anti-beta galactosidase pour faire de l'immunolocalisation, via microscopie électronique, de bactéries produisant le lacZ au sein de tissus végétaux.
J'aurais ainsi voulu savoir quelles sont vos connaissances sur l'efficacité de vos anticorps dans un contexte végétal ou bactérien (autre que E. Coli) et si vous pouviez me conseiller un produit?
Je reste à votre disposition si vous souhaitez plus d'informations.
En vous remerciant de votre réponse,

ANSWER:

Merci de nous avoir contactés.

Les 2 anticorps que je recommanderais parmi les 18 références catalogue que nous avons sont :

ab9361, un polyclonal depoulet (IgY) qui a été testé dans 8 applications différentes, cité dans 42 publications et pour lequel nous avons reçus 19 exemples d'utilisation par nos clients (voir les Abreviews). Le lien vers la fiche technique est : http://www.abcam.com/ab9361.

ab616, un polyclonal de lapin, également très bien décrit en ELISA, WB et IP, 53publications, 37 Abreviews. http://www.abcam.com/ab616 .



J'espère que ces informations vous seront utiles. N'hésitez pas à nous contacter de nouveau si vous avez d'autres questions.

Bonjour,
Merci pour votre mail : toute aide est la bienvenue !
Pour finir un article concernant l'étude d'un mutant Lyl-1-LacZ, je dois confirmer l'expression de Lyl-1 par un type cellulaire X (macrophages embryonnaires), soit par l'identification de Lyl-1 (transcription factor), soit pas celle de la Beta-Gal.
Les anticorps que je teste à l'heure actuelle sont les suivants :
Anti-Beta-gal : ab9361 (Lot GR 49531-1). J'avais testé précédemment l'anticorps ab 616-1 (lot 95968) et il n'avait pas marché).
Anti-Lyl-1: ab30334 (lot GR 52627-1) (J'avais aussi testé le ab53354, il y a quelques temps, sans succès)
Je travaille sur coupe au cryostat d'embryons de souris. Fixation PAF4%; Perm: PBS1%triton; Blocking; 10%SVF; AC1: 4°C o/n; AC2 (couplé alexa: 1/400); 1h @T°amb. Témoins sans AC1. Je fais des co-marquage avec d'autres AC1 membrannaires Rat anti mouse directement couplés.

Un grand merci d'avances pour toute information sur ces anticorps qui me permettrais de progresser !
Avec mes cordiales salutations,

ANSWER:

Merci pour ces précisions.

Anti-beta galactosidases :

l'anticorps ab616 n'a pas été testé en IHC-Fr, ce produit ne fonctionne peut-être pas dans cette application.

Le ab9361 a lui été testé en IHC-Fr, nous avons d'ailleurs sur la fiche de ce produit beaucoup d'Abreviews (résultats provenant d'utilisateurs) dont 8 en IHC-Fr avec fixation en PFA. La perméabilisation est en effet recommandée, mais la quantité de Triton est peut-être un peu trop élevée. Je conseillerai 0.2 - 0.5% maximum. De plus, un démasquage de l'antigène est peut-être nécessaire. Un utilisateur a obtenu un bon marquage de la beta-gal après avoir fait un démasquageprotéique (protéinase K, http://www.abcam.com/index.html?datasheet=9361&tab=abreviews&intabreviewid=21687). D'après les Abreviews, une dilution entre 1/500 et 1/4000 semble fonctionner. A quelle dilution avez-vous utilisé cet anticorps?

Anticorps anti-Lyl1 :

Aucun des anti-Lyl1 n'a encore été testé en IHC-Fr. J'appliquerai les mêmes recommandations que pour les anti-beta Gal.Pour la dilution initiale jesuggère 1/100.

J'espère que ces informations vous aideront. Si nos suggestions ne permettent pas d'améliorer vos résultats, n'hésitez pas à me recontacter et je vous ferai parvenir une unité de remplacement avec un lot ou une référence différente (ab111067 pour l'anti-Lyl1 car il a été testé en IHC-P et il est prédit pour fonctionner chez la souris).