Biotin Anti-Digoxigenin antibody [BT.21H8] (ab419)

Vielen Dank für Ihre Email. Es tut mir leid zu hören, dass Ihr versuch nicht optimal läuft.

Wenn ich Sie richtig verstehen haben sie den sekundären Antikörper (ab99900) mit einem anderen primären Antikörper ausprobiert? Und Sie konnten ein Signal sehen?

Das bedeutet, dass, wie Sie schon annehmen, die Bindung vom Sekundaren Antikörper an den primären nicht optimal ist. Ich schlage deshalb vor den sekundären weniger zu verdünnen.

Ich schlage auch vor eine Negativkontrolle durchzuführen für den ersten Versuch: Die Beads könnten unspezifisch an streptavidin (mit Fluoreszenz) binden und so ein falsch positive Ergebnisse zeigen. Eine negative Kontrolle ohne Antikörper könnte das aufdecken.

Manche sekundären Antikörper erkennen die verschiedene IgG Isotypen mit unterschiedlicher Affinität. Vielleicht können Sie sich einen andern sekundären Antikörper von einem Nachbarlabor ausleihen und diesen für einen Versuch verwenden?

Beide primären Antikörper sind bis jetzt nicht im FACS getestet worden.

Ich hoffe, diese Vorschläge helfen bei der Aufklärung. Bitte lassen sie mich wissen, wie die Versuche ausgehen.

Vielen Dank für Ihre Antwort.

Es freut mich zu hören, dass das Experiment mit einem unkonjugierten Antikörperfunktioniert hat.

Leider ist es nicht möglich die Konzentration von ab420 zu bestimmen. Bei ab420 handelt es sich um unaufgereinigtes Aszites. Die Konzentration von Antikörpern wird über die Proteinmenge bestimmt. Aszites enthält aber nicht nur den spezifischen Antikörper sondern auch andere Proteine und macht deshalb eine Konzentrationsbestimmung unmöglich.

Wir empfehlen 5mg/ml als Anhaltspunkt anzunehmen für Aszites.

Es tut mir leid, dass ich Ihnen keine genauere Angaben machen konnte und hoffe diese Information ist dennoch hilfreich.

Ich wünsche Ihnen weiterhin viel Erfolg mit Ihrer Forschung und verbleibe

Vielen Dank für Ihre Anfrage.

Wenn Antikörper mit Biotin gekoppelt werden, wird das meist über freie Anime getan. Das bedeutet das Biotin über den ganzen Antikörper verteilt ist. Die Antikörper werden dann darauf getestet, dass die Bindestelle, die das Zielprotein bindet, nicht von Biotin besetzt ist.

Lange Rede kurzer Sinn: Die Biotin-Moleküle stören sehr wahrscheinlich wenn dann ein Zweitantikörper eingesetzt wird um den primären Antikörper zu binden.

Ich schlage deshalb, wie Sie schon richtig vermuteten, vor einen ungekoppelten primaeren Antikörper für Versuch 2 zu verwenden.

Um den unwahrscheinlichen Fall auszuschließen, dass es sich bei dem sekundären Antikörper um einen fehlerhaften Antikörper handelt, schlage ich aber vor, zuerst den sekundären mit einem anderen primären zu testen. Falls der sekundäre einen anderen angekoppelten primären Antikörper aus der Maus nicht erkennt, werde ich Ihnen den sekundären Antikörper gerne ersetzen.

Ich hoffe, ich konnte Ihnen mit diesen Informationen weiterhelfen. Bitte lassen Sie mich wissen, falls Sie weitere Fragen haben oder der sekundäre Antikörper im Test mit einem un-gekoppelten primären Antiköper nicht funktioniert.

Thank you for your enquiry. We do not provide MS data sheets for our products. All necessary information is located on the product datasheet (which can be viewed online or was shipped with the product).

We are sorry to inform you that this data is not available.

My apologies ab419 quite obivously is biotinylated. My only excuse is that for some reason our internal system isn't showing the conjugate when I search. The antibody is guaranteed for what it says on the datasheet i.e tested applications, species etc (this is important as we cannot guarantee it for everything). We may be able to offer you a discount on the product if you are worried about final results. If this is the case then please let me know.