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RecombinantRabMAb

Recombinant Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)

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Flow Cytometry - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
  • Western blot - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
  • Western blot - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
  • Immunocytochemistry/ Immunofluorescence - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
  • Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)

Key features and details

  • Produced recombinantly (animal-free) for high batch-to-batch consistency and long term security of supply
  • Rabbit monoclonal [E399] to Cyclin A2
  • Suitable for: WB, ICC/IF, Flow Cyt, IP
  • Reacts with: Human

Conjugates logo Related conjugates and formulations

Carrier Free HRP

Overview

  • Product name

    Anti-Cyclin A2 antibody [E399]
    See all Cyclin A2 primary antibodies

  • Description

    Rabbit monoclonal [E399] to Cyclin A2

  • Host species

    Rabbit

  • Tested applications

    Suitable for: WB, ICC/IF, Flow Cyt, IPmore details

  • Species reactivity

    Reacts with: Human

  • Immunogen

    Synthetic peptide within Human Cyclin A2 aa 100-200 (N terminal). The exact sequence is proprietary.

  • Epitope

    ab32498 reacts with an epitope located in the N terminal region of Cyclin A2

  • Positive control

    • ICC/IF: HeLa (Human cervix adenocarcinoma epithelial cell) WB: HeLa untreated, HeLa treated G1/S phase, K562 and HeLa cell lysate

  • General notes

    We are constantly working hard to ensure we provide our customers with best in class antibodies. As a result of this work we are pleased to now offer this antibody in purified format. We are in the process of updating our datasheets. The purified format is designated ‘PUR’ on our product labels. If you have any questions regarding this update, please contact our Scientific Support team.

    This product is a recombinant monoclonal antibody, which offers several advantages including:

    • - High batch-to-batch consistency and reproducibility
    • - Improved sensitivity and specificity
    • - Long-term security of supply
    • - Animal-free production
    For more information see here.

    Our RabMAb® technology is a patented hybridoma-based technology for making rabbit monoclonal antibodies. For details on our patents, please refer to RabMAb® patents.

    Mouse, Rat: We have preliminary internal testing data to indicate this antibody may not react with these species. Please contact us for more information.

Properties

Applications

The Abpromise guarantee

Our Abpromise guarantee covers the use of ab32498 in the following tested applications.

The application notes include recommended starting dilutions; optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

Application Abreviews Notes
WB
1/1000. Predicted molecular weight: 48 kDa.
ICC/IF
1/50.
Flow Cyt
1/30.
IP
1/20.
Notes
WB
1/1000. Predicted molecular weight: 48 kDa.
ICC/IF
1/50.
Flow Cyt
1/30.
IP
1/20.

Target

  • Function

    Essential for the control of the cell cycle at the G1/S (start) and the G2/M (mitosis) transitions.

  • Sequence similarities

    Belongs to the cyclin family. Cyclin AB subfamily.

  • Developmental stage

    Accumulates steadily during G2 and is abruptly destroyed at mitosis.

  • Cellular localization

    Nucleus. Cytoplasm. Cytoplasmic when associated with SCAPER.
  • Information by UniProt

  • Database links

    • Alternative names

      • CCN1 antibody
      • CCNA antibody
      • Ccna2 antibody
      • CCNA2_HUMAN antibody
      • Cyclin A2 antibody
      • Cyclin-A antibody
      • Cyclin-A2 antibody
      see all

    Images

    • Flow Cytometry - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      Flow Cytometry - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)

      Flow Cytometry analysis of HeLa (Human cervix adenocarcinoma epithelial cell) cells labelling Cyclin A2 with Purified ab32498 at 1:30 dilution (10 µg/ml) (Red). Cells were fixed with 4% Paraformaldehyde and permeabilised with 90% Methanol. A Goat anti rabbit IgG (Alexa Fluor™ 488, ab150077) secondary antibody was used at 1:2000. Isotype control - Rabbit monoclonal IgG (Black). Unlabelled control - Cell without incubation with primary antibody and secondary antibody (Blue).

    • Western blot - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      Western blot - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      All lanes : Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498) at 1/1000 dilution (Purified)

      Lane 1 : HeLa (Human epithelial cell line from cervix adenocarcinoma) lysate; Untreated, asynchronous cells (ab136811)
      Lane 2 : HeLa (Human epithelial cell line from cervix adenocarcinoma) lysate; G1/S arrested cells (thymidine treatment) (ab136811)
      Lane 3 : HeLa (Human epithelial cell line from cervix adenocarcinoma) lysate; G2/M arrested cells (sequential thymidine and nocodazole treatments) (ab136811)

      Secondary
      All lanes : Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab97051) at 1/20000 dilution

      Predicted band size: 48 kDa
      Observed band size: 50 kDa why is the actual band size different from the predicted?



      Cyclin A2 is down regulated at the G2/M phase.

    • Western blot - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      Western blot - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      All lanes : Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498) at 1/2000 dilution (Purified)

      Lane 1 : K-562 (Human chronic myelogenous leukemia lymphoblast) whole cell lysate
      Lane 2 : HeLa (Human cervix adenocarcinoma epithelial cell) whole cell lysate

      Secondary
      All lanes : Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab97051) at 1/20000 dilution

      Predicted band size: 48 kDa
      Observed band size: 50 kDa why is the actual band size different from the predicted?



      The smaller band is due to a tissue-specific splice variant(PMID 22745723). The band of 35kDa maybe the cleaved form(PMID: 12176996).

    • Immunocytochemistry/ Immunofluorescence - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      Immunocytochemistry/ Immunofluorescence - Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      Immunocytochemistry analysis of HeLa (Human cervix adenocarcinoma epithelial cell) cells labeling Cyclin A2 with Purified ab32498 at 1/50 dilution (5.66 µg/mL). Cells were fixed in 4% Paraformaldehyde and permeabilized with 0.1% tritonX-100. Cells were counterstained with Ab195889 Anti-alpha Tubulin antibody [DM1A] - Microtubule Marker (Alexa Fluor® 594) 1/200 (2.5 µg/mL). Goat anti rabbit IgG (Alexa Fluor® 488, ab150077) was used as the secondary antibody at 1/1000 (2 µg/mL) dilution. DAPI (blue) was used as nuclear counterstain. PBS instead of the primary antibody was used as the secondary antibody only control.
    • Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)
      Anti-Cyclin A2 antibody [E399] (ab32498)

    Protocols

    To our knowledge, customised protocols are not required for this product. Please try the standard protocols listed below and let us know how you get on.

    Click here to view the general protocols

    References (9)

    Publishing research using ab32498? Please let us know so that we can cite the reference in this datasheet.

    ab32498 has been referenced in 9 publications.

    • Yang C  et al. Study of the cytological features of bone marrow mesenchymal stem cells from patients with neuromyelitis optica. Int J Mol Med 43:1395-1405 (2019). PubMed: 30628649
    • Lopez-Martinez D  et al. Phosphorylation of FANCD2 Inhibits the FANCD2/FANCI Complex and Suppresses the Fanconi Anemia Pathway in the Absence of DNA Damage. Cell Rep 27:2990-3005.e5 (2019). PubMed: 31167143
    • Iwahori S & Kalejta RF Phosphorylation of transcriptional regulators in the retinoblastoma protein pathway by UL97, the viral cyclin-dependent kinase encoded by human cytomegalovirus. Virology 512:95-103 (2017). PubMed: 28946006
    • Iwahori S  et al. Human cytomegalovirus-encoded viral cyclin-dependent kinase (v-CDK) UL97 phosphorylates and inactivates the retinoblastoma protein-related p107 and p130 proteins. J Biol Chem 292:6583-6599 (2017). PubMed: 28289097
    • Zhang YY  et al. Iodine regulates G2/M progression induced by CCL21/CCR7 interaction in primary cultures of papillary thyroid cancer cells with RET/PTC expression. Mol Med Rep 14:3941-6 (2016). PubMed: 27574129
    • Wei X  et al. Proteomics-based identification of the tumor suppressor role of aminoacylase 1 in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett 351:117-25 (2014). WB ; Human . PubMed: 24846301
    • Wu Z  et al. The inhibitory role of Mir-29 in growth of breast cancer cells. J Exp Clin Cancer Res 32:98 (2013). WB . PubMed: 24289849
    • Yajima H  et al. The complexity of DNA double strand breaks is a critical factor enhancing end-resection. DNA Repair (Amst) 12:936-46 (2013). PubMed: 24041488
    • Edel MJ  et al. A protocol to assess cell cycle and apoptosis in human and mouse pluripotent cells. Cell Commun Signal 9:8 (2011). WB . PubMed: 21481269

    Customer reviews and Q&As

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    1-3 of 3 Abreviews or Q&A

    Question

    Hallo!
    Der Westernblot sieht wirklich gut aus. Könnten Sie mir vielleicht das
    dazugehörige Protokoll inklusive Zellaufschluss usw. schicken? Ich denke
    nämlich nicht, dass das Problem mit dem Westernblot an den AKs liegt
    sondern an meiner mangelnden Erfahrung mit Westernblots...
    Die Westernblots mache ich ja überhaupt nur, weil die beiden AKs ab32498
    und ab39 in der Zellfärbung, die jeweils für sich betrachtet gut
    funktioniert, zu einem großen Teil nicht kolokalisieren, obwohl sie für
    das gleiche Epitop spezifisch sein sollten. Ich hänge noch mal ein Bild
    von HeLa-Zellen an (grün Kaninchen, rot Maus). Den Westernblot wollte
    ich nur zur Kontrolle machen, ob die Banden zumindest bei der gleichen
    Größe kommen.
    Hätten Sie vielleicht die Möglichkeit die Zellfärbung bei sich zu
    wiederholen? Falls ja, könnten Sie ja vielleicht mal kontrollieren, wie
    Doppelfärbungen mit jeweils einem polyklonalen CycA-AK aussehen?!
    Schöne Grüße,
    Peter Zentis

    Read More
    Answer

    Ich denke wirklich, dass Ihr Problem mit diesen Aks nicht auf den WB begrenzt ist , da mir die ICC Färbung nicht spezifisch erscheint. Ich würde die Färbung definitiv eher nuklear lokalisiert erwarten, und das ist sie einfach nicht.
    Wir verwenden stets unser Standard Protokoll für WB, wenn Sie keinen Hinweis auf unserem Datenblatt finden. Da Sie sich als WB-Anfänger bezeichen, habe ich Ihnen unseren Beginners-Guide an diese Email gehängt (und auch alte WB Hasen können da noch was lernen ;) ) Desweiteren habe ich Ihnen noch eine Publikation angehängt, mit der Sie eine positive Kontrolle für Ihre Proben anfertigen können, in dem Sie alle Zellen für die G2 phase synchronisieren, in der am meisten Cyclin A expremiert wird.
    Bevor Sie weiter experimentieren, möchte ich Ihnen daher einen kostenlosen Ersatz für ab29 und ab32498 anbieten. Leider sieht es so aus, als ob der ab39 schon im September bestellt wurde, dh, er ist weit über unseren Garantiezeitraum von 6 Monaten hinaus bestellt worden. Wann haben Sie den bemerkt, dass es zu Problemen mit der Färbung kam?
    Ich hoffe, dies hilft Ihnen weiter und ich warte auf Ihre Antwort.
    Benutzen Sie unsere Produkte? Schicken Sie uns einen Abreview. Verdienen Sie sich eine Belohnung!
    https://www.abcam.com/abreviews

    Read More

    Question

    Ich wollte Ihnen nur Nachricht geben, dass meine bisherigen Versuche die
    beiden AKs im Westernblot zu testen erfolglos waren. Allerdings habe ich
    wenig Erfahrung mit Westernblots im Allgemeinen und dem Einsatz der
    beiden AKs im Speziellen. Ich habe bei meinem letzten Versuch beide AKs
    1/500 verdünnt und den Blot über Nacht bei 4°C inkubiert. Das Ergebnis:
    Gar kein Signal mit dem Maus-AK und sehr schwaches unspezifisches (nicht
    als Bande sonder als Schmier über die ganze Spur auftretendes) Signal
    mit dem Kaninchen-AK.
    Ich werde nächste Woche einen neuen Versuch starten. Falls Sie Tipps
    haben, wäre ich Ihnen dankbar...
    Abgesehen vom Blot, habe ich die Doppelfärbung nun an HeLa-Zellen
    wiederholt, mit dem gleichen Resultat wie zuvor an den Brustkrebslinien:
    allenfalls zufällige Kolokalisation! Falls Sie möchten, kann ich Ihnen
    gerne Bilder davon schicken.
    Schönes Wochenende,
    Peter Zentis

    Read More
    Answer


    Ich habe Ihnen einen Blot mit dem ab32498 an diese Email gehängt: von einem Schmier keine Spur! Was mir allerdings aufgefallen ist, ist dass der Verdünnungsfaktor um 10 verkleinert wurde. Ich habe unser Datenblatt dementsprechend verändert. Falls eine Verringerung der Antikörperkonzentration keine Verbesserung bringt, werde ich Ihnen gerne neben den ab39 auch den ab32498 esetzen.
    Ich hoffe, dies hilft Ihnen weiter. Bitte zögern Sie nicht, sich wieder bei uns zu melden, falls Sie weitere Fragen haben.

    Read More

    Question

    Does this antibody cross-react with Cyclin A1? Have you tested this? What is the homology of the immunogen with Cyclin A1?

    Read More
    Answer

    Thank you for your inquiry. The lab has not tested this antibody for its cross-reactivity with Cyclin A1. But when we BLASTed the immunogen sequence against Cyclin A1, we did not see any significant sequence similarity. Thus, we do not predict cross-reactivity. I hope this information helps. Please contact us with any other questions.

    Read More

    Please note: All products are "FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES"
    For licensing inquiries, please contact partnerships@abcam.com