Anti-Digoxigenin antibody [21H8] (ab420)

Thank you very much for your call yesterday and for your patience while I've been in touch with the lab about this antibody.

The antibody is protein A purified then lyophilized from a buffer ofTris 0.1M, glycine 0.1M, sucrose 2%,andit is later re-suspended with sterile water.

I hope that this information will be useful, but please let me know if you have any further questions and I'll be happy to help.

Thank you for contacting us.
Technically the charge on antibodies at pH7 should be neutral however it depends on antibody.
We do not have any information about charge for ab420 so I am sorry we are unable to share any information.
I hope this information is helpful to you. Please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.
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https://www.abcam.com/abreviews

Thank you for contacting Abcam regarding ab420.


The antibody has previously been sold as an ascitic fluid (concentration not determined because not relevant).


More recently we have provided protein A purified antibody packaged as 100 ug in 200ul to reach a final concentration of 0.5 mg/ml.


I hope this information is helpful. Please do not hesitate to contact us if you have any additional questions.

Vielen Dank für Ihre Antwort.

Ich kann Ihnen ein Röhrchen von einem der folgenden Antiköpern anbieten. Alle sind gegen Maus IgG1 gerichtet, FITC konjugiert und für Flow Cytometry getestet und garantiert:

ab97239

https://www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG1-heavy-chain-FITC-ab97239.html (or use the following: https://www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG1-heavy-chain-FITC-ab97239.html).

ab98692

https://www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG1-heavy-chain-FITC-preadsorbed-ab98692.html (or use the following: https://www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG1-heavy-chain-FITC-preadsorbed-ab98692.html).

ab133859

https://www.abcam.com/Rat-monoclonal-SB77e-Mouse-IgG1-HL-FITC-preadsorbed-ab133859.html (or use the following: https://www.abcam.com/Rat-monoclonal-SB77e-Mouse-IgG1-HL-FITC-preadsorbed-ab133859.html).

ab11588

https://www.abcam.com/Rat-monoclonal-LO-MG-1-2-Mouse-IgG1-heavy-chain-FITC-ab11588.html (or use the following: https://www.abcam.com/Rat-monoclonal-LO-MG-1-2-Mouse-IgG1-heavy-chain-FITC-ab11588.html).

Bitte lassen Sie mich wissen, welchen Antikörper Sie bevorzugen.

Vielen Dank für Ihre Email. Es tut mir leid zu hören, dass Ihr versuch nicht optimal läuft.

Wenn ich Sie richtig verstehen haben sie den sekundären Antikörper (ab99900) mit einem anderen primären Antikörper ausprobiert? Und Sie konnten ein Signal sehen?

Das bedeutet, dass, wie Sie schon annehmen, die Bindung vom Sekundaren Antikörper an den primären nicht optimal ist. Ich schlage deshalb vor den sekundären weniger zu verdünnen.

Ich schlage auch vor eine Negativkontrolle durchzuführen für den ersten Versuch: Die Beads könnten unspezifisch an streptavidin (mit Fluoreszenz) binden und so ein falsch positive Ergebnisse zeigen. Eine negative Kontrolle ohne Antikörper könnte das aufdecken.

Manche sekundären Antikörper erkennen die verschiedene IgG Isotypen mit unterschiedlicher Affinität. Vielleicht können Sie sich einen andern sekundären Antikörper von einem Nachbarlabor ausleihen und diesen für einen Versuch verwenden?

Beide primären Antikörper sind bis jetzt nicht im FACS getestet worden.

Ich hoffe, diese Vorschläge helfen bei der Aufklärung. Bitte lassen sie mich wissen, wie die Versuche ausgehen.

Vielen Dank für Ihre Antwort.

Es freut mich zu hören, dass das Experiment mit einem unkonjugierten Antikörperfunktioniert hat.

Leider ist es nicht möglich die Konzentration von ab420 zu bestimmen. Bei ab420 handelt es sich um unaufgereinigtes Aszites. Die Konzentration von Antikörpern wird über die Proteinmenge bestimmt. Aszites enthält aber nicht nur den spezifischen Antikörper sondern auch andere Proteine und macht deshalb eine Konzentrationsbestimmung unmöglich.

Wir empfehlen 5mg/ml als Anhaltspunkt anzunehmen für Aszites.

Es tut mir leid, dass ich Ihnen keine genauere Angaben machen konnte und hoffe diese Information ist dennoch hilfreich.

Ich wünsche Ihnen weiterhin viel Erfolg mit Ihrer Forschung und verbleibe

Thank you for contacting us. For a valid comparison, we would need to test the two antibodies together in the same assay on the same material. Sometimes a dissociation constant is calculated for antibodies and the antigens they bind to, which allows comparison of different antibodies, but this is rare, and the dissociation constant of ab420 has not been determined. For a very rough comparison, I suggest comparing the ranges of dilutions that are listed in the ab420 application notes with the dilutions you typically use with your sheep polyclonal. However, the suggested ab420 dilution ranges are quite broad: there is a 10-fold difference between the high and low suggestions for each assay type. I hope this is at least somewhat helpful. Please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.

Thank you for your enquiry. I have been in contact with the originator of ab420 Digoxigenin antibody [21H8] and I can confirm that this has been tested for this application (anti-dig-dig labeled ssDNA interaction) with a hybridisation buffer SSC 5X (NaCl 0,75M, Sodium citrate 75 mM, pH 7) and gave good results. However, I don't know if this buffer has the right concentration for you? I can suggest trying a lower concentration, though I am sorry we would not be able to provide any information on what the results would be on this occasion. I hope this is helpful to you. Should you have any further questions, please do not hesitate to contact us.

Thank you for your enquiry. I can confirm that this product contains the Fc fragment.

Thank you for your enquiry. The hybridoma used to make this product was developed from mice as indicated on the data sheet. The immunogen (digoxigenin) was used following the standard protocol for the development of monoclonal antibody. Then fusion was made using splenocyte and myeloma SP2OAG. I hope this information will be useful.