Anti-Dopamine beta Hydroxylase antibody (ab19353)

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I am very pleased to hear you would like to accept our offer and test ab19353 in IHC-Fr. This code will give you xxx off your next order before the expiration date. To redeem this offer, please submit an Abreview for IHC-Fr and include this code in the “Additional Comments” section so we know the Abreview is for this promotion. Please remember that submission of the Abreview is sufficient for the discount code to become active.
For more information on how to submit an Abreview, please visit the site: www.abcam.com/Abreviews.


Remember, we publish both positive and negative Abreviews on our datasheets so please submit the results of your tests. The code will be active once the Abreview has been submitted and can be redeemed in one of the following ways: 1) Call to place your order and mention the code to our customer service department; 2) Include the code in your fax order; 3) Place your order on the web and enter the promotional code.

Any feedback that you can provide will be greatly appreciated, whether positive or negative. If you have any further questions, please do not hesitate to contact us. We look forward to receiving your Abreview and wish you luck with your research.

The terms and conditions applicable to this offer can be found here: www.abcam.com/abtrial.

Merci beaucoup de votre réponse et de vous avoir pris le temps de remplir le questionnaire.

Effectivement le point qui saute à l'œilen regardant leprotocole, est la méthode d'extraction de la protéine et préparation du lysat. J'ai aussi discuté ce point avec une collègue. Je vous suggère donc d'utiliser un tampon avec des détergents pour pouvoir extraire effectivement les protéines et pour ne pas devoir avoir une étape aussi longe de sonication et d'homogénéisation.

Je vous recommande donc fortement de préparer un lysat avec un tampon NP-40 pour s'assurer de l'extraction des protéines du cerveau?
Voici la composition du tampon et protocole que je peux recommander:

Nonidet-P40 (NP40) buffer

150 mM NaCl
1.0% NP-40 (possible to substitute with 0.1% Triton X-100)
50 mM Tris-HCl pH 8.0
Protease Inhibitors

Preparation of lysate from tissues

Dissect the tissue of interest with clean tools, on ice preferably, and as quickly as possible to prevent degradation by proteases.
Place the tissue in round-bottom microcentrifuge tubes or Eppendorf tubes and immerse in liquid nitrogen to “snap freeze”. Store samples at -80°C for later use or keep on ice for immediate homogenization. For a ˜5 mg piece of tissue, add ˜300 μl lysis buffer rapidly to the tube, homogenize with an electric homogenizer, rinse the blade twice with another 2 x 300 μl lysis buffer, then maintain constant agitation (for example, on an orbital shaker) for 2 hours at 4°C.
Centrifuge for 20 minutes at 16,000 x g at 4°C in a microcentrifuge for 20 minutes. Gently remove the tubes from the centrifuge and place on ice. Transfer the supernatant to a fresh tube kept on ice. Discard the pellet.



Pour plus d'information, veuillez ne pas hésiter à nous recontacter ou aussi de consulter notre protocole en ligne: https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=13045

J'espère que cette suggestion va résoudre le problème. N'hésitez pas à me recontacter si vous souhaitez discuter un de ces points en plus de détails. Veuillez aussi me tenir au courant de vos résultats. Je vous remercie de votre collaboration.

Je suis désolée d'apprendre que ab19353 ne vous donne pas de bons résultats en Western blot.

Veuillez trouver ci-jointlequestionnaire discuté au téléphone qui nous permet de regrouper le plus d'informations possible sur le protocole que vous avez utilisé avec cet anticorps.
Celui-ci nous permettra de vous fournir la meilleure assistance technique.

Si nous concluons que notre produit est fautif et ne fonctionne pas comme explicité par notre fiche technique, nous serons ravis de mettre en place l'envoi d'un tube de remplacement gratuit ou d'un remboursement (sous réserve d'une commande ultérieure de 180 jours).

Je vous remercie par avance de nous envoyer votre protocole.

Thank you for sending your protocol information. We haven't tested this antibody with perfusion-fixed or free floating tissue, but we generally recommend using an antigen retrieval method with formaldehyde-fixed tissue, as formaldehyde crosslinks proteins and the antibody binding sites can be masked. It is more difficult to perform heat-mediated retrieval with free-floating tissue, but you can try an enzymatic treatment with proteinase K or trypsin. We have some antigen retrieval protocols at the following link, just scroll down to the bottom of the page for enzymatic protocols- https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11488#3 I also recommend testing the secondary antibody with a different sheep primary antibody, to ensure that it is functional. I hope this information is helpful, but please let me know if you have further questions or concerns.