Overview

  • Product name

  • Description

    Rabbit polyclonal to GPCR GPR3
  • Host species

    Rabbit
  • Tested applications

    Suitable for: ICC/IF, WB, IHC-Pmore details
  • Species reactivity

    Reacts with: Mouse, Rat, Human
  • Immunogen

    Synthetic peptide corresponding to 13 amino acids from near the C terminus of Human GPR3 (P46089).

  • Positive control

    • EL4 cell lysate, Human spleen tissue.

Properties

  • Form

    Liquid
  • Storage instructions

    Shipped at 4°C. Store at 4°C (stable for up to 12 months). Store at -20°C or -80°C.
  • Storage buffer

    Preservative: 0.02% Sodium azide
    Constituent: PBS
  • Concentration information loading...
  • Purity

    Immunogen affinity purified
  • Clonality

    Polyclonal
  • Isotype

    IgG
  • Research areas

Applications

Our Abpromise guarantee covers the use of ab106589 in the following tested applications.

The application notes include recommended starting dilutions; optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

Application Abreviews Notes
ICC/IF Use a concentration of 20 µg/ml.
WB Use a concentration of 1 - 2 µg/ml. Predicted molecular weight: 35 kDa.
IHC-P Use a concentration of 2.5 µg/ml.

Target

  • Function

    Orphan receptor with constitutive G(s) signaling activity that activate cyclic AMP. Has a potential role in modulating a number of brain functions, including behavioral responses to stress (By similarity), amyloid-beta peptide generation in neurons and neurite outgrowth (By similarity). Maintains also meiotic arrest in oocytes.
  • Tissue specificity

    Expressed predominantly in the central nervous system, and at low levels in the lung, kidney, testis, ovary and eye. Highly expressed in regions of the brain implicated in the Alzheimer disease.
  • Sequence similarities

    Belongs to the G-protein coupled receptor 1 family.
  • Cellular localization

    Cell membrane.
  • Information by UniProt
  • Database links

  • Alternative names

    • ACCA antibody
    • ACCA orphan receptor antibody
    • Adenylate cyclase constitutive activator antibody
    • G protein coupled receptor 3 antibody
    • G-protein coupled receptor 3 antibody
    • Gpr3 antibody
    • GPR3_HUMAN antibody
    • Probable G protein coupled receptor GPR3 antibody
    see all

Images

  • Western Blot of EL4 cell lysate labeling GPCR GPR3 with Anti-GPCR GPR3 antibody (ab106589) at (1) 1 and (2) 2µg/ml.
  • ab106589, at 2.5 ug/ml, staining GPCR GPR3 in Human spleen tissue by immunohistochemistry.
  • Immunofluorescence of GPR3 in Human Spleen cells using ab106589 at 20 ug/ml.

References

ab106589 has not yet been referenced specifically in any publications.

Customer reviews and Q&As

1-6 of 6 Abreviews or Q&A

Application
Western blot
Loading amount
10 µg
Gel Running Conditions
Non-reduced Non-Denaturing (Native) (4-12% Bis-Tris Gel, MES running buffer)
Sample
Mouse Tissue lysate - whole (Mouse whole brain tissue lysate, striatum/cortex)
Specification
Mouse whole brain tissue lysate, striatum/cortex
Blocking step
BSA as blocking agent for 1 hour(s) and 0 minute(s) · Concentration: 5% · Temperature: 25°C

Abcam user community

Verified customer

Submitted Sep 05 2013

Answer

Ya he realizado el nuevo pedido completamente gratuito del anticuerpo ab81530.
Lamentablemente el anticuerpo no está actualmente en stock, por lo que puede tardar en llegaros entre 1 y 2 semanas.
Si necesitáis cualquier información referente al pedido, no dudéis en contactarnos, referenciando el número de éste: XXXXX.
Espero que este nuevo anticuerpo funcione según lo esperado.
No dudéis en contactarnos para cualquier otra duda o sugerencia.

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Answer

Gracias por tu respuesta.
Siento mucho que los resultados no hayan mejorado. A pesar de que la garantía ha expirado, al no haber pasado mucho tiempo de ello puedo hacer una excepción y extenderla para enviaros un anticuerpo diferente o un reembolso en compensación por el tiempo invertido y las molestias causadas.
La alternativa disponible contra la misma proteína validada en WB con lisados de ratón es:
https://www.abcam.com/GPCR-GPR3-antibody-ab81530.html
Espero tu respuesta para que me indiques que opción te conviene más.

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Answer

Gracias por mantenerte a la espera, te pido disculpas por ello.
Me comentan mis compañeros del laboratorio que ellos también han observado una banda a elevado peso molecular en homogenados cerebrales. Dado que GPR3 es una proteína membranal “multi-pass” que además presenta tres potenciales posiciones de fosforilación, además de glicosilacion y uniones de extensiones lipidícas, se esperan migraciones aleatorias en los blots.
¿Qué tal han ido los resultados con el KO?
Espero tu respuesta para saber cómo te podemos ayudar.

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Answer

Gracias por contactarnos.
Siento mucho que volváis a tener problemas con este anticuerpo, y te agradezco que nos hayas enviado información e imágenes de los resultados. Para tratar de entender mejor el problema te agradecería que me aclararas algunos puntos adicionales del protocolo seguido:
- ¿Qué células se han usado, a que especie corresponden? ¿Habéis usado lisado total de la proteína o alguna fracción subcelular?
-¿Cómo se ha llevado a cabo la lisis, que buffer se utilizó? ¿Se han usado algún tipo de inhibidores enzimáticos?
-¿Qué porcentaje de gel y qué tipo de membrana se han usado?
Es importante también usar un control positivo (en este caso lisado de EL4 es una buena opción) en caso de no haberlo hecho.
Te agradecería también que por favor me enviaras el número de pedido y/o lote del anticuerpo, para verificar que no ha habido ningún problema durante su envío.
Espero entonces tu respuesta. Muchas gracias por tu colaboración.

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Question

LOT NUMBER XXXXX DESCRIPTION OF THE PROBLEM No staining SAMPLE Las muestras son de cerebro de ratón,. En estas regiones se ha hallado presencia del mRNA del receptor por ISH por lo que debería haber señal del anticuerpo. PRIMARY ANTIBODY vuestro anticuerpo anti GPR3 diluido 1/100. He probado en: - TBS 50mM pH 7,4 + 5% suero de cabra + tween20 0,1% - PBS 100mM pH 7,4 + 5-10% suero de cabra + triton X100 0,3% Lavados con TBS o PBS con 0,05% tween20 DETECTION METHOD Microscopio de fluorescencia POSITIVE AND NEGATIVE CONTROLS USED He usado el control negativo sin anticuerpo primario y el marcaje positivo de GFAP para el control del correcto funcionamiento del anticuerpo secundario. ANTIBODY STORAGE CONDITIONS Tal y como indica el datasheet cuando lo recibí lo alocuoté y lo guardé a -20ºC FIXATION OF SAMPLE He probado tanto muestras procedentes de animales perfundidos con PFA 4% y posteriormente congelados como de cerebros congelados sin perfundir y posteriormente (una vez cortadas las secciones de 10um) fijados en PFA 4% durante 40min. ANTIGEN RETRIEVAL He usado una incubación de 20min a temperatura ambiente con NaBH4 al 1% en Na2HPO4 0,1M pH 8,5 PERMEABILIZATION STEP No he hecho un paso de permeabilización específico BLOCKING CONDITIONS El bloqueo es de 1h de duración a temperatura ambiente. He probado: - TBS 50mM pH 7,4 + 5% suero de cabra - PBS 100mM pH 7,4 + 5-10% suero de cabra SECONDARY ANTIBODY Anti rabbit Alexa594 durante 2 horas a temperatura ambiente, 1/200 en: - TBS 50mM pH 7,4 + 5% suero de cabra - PBS 100mM pH 7,4 + 5-10% suero de cabra - PBS 100mM pH 7,4 + 5-10% suero de cabra + triton X100 0,3% Lavados con TBS o PBS con 0,05% tween20 HOW MANY TIMES HAVE YOU TRIED THE APPLICATION? 5 HAVE YOU RUN A "NO PRIMARY" CONTROL? Yes DO YOU OBTAIN THE SAME RESULTS EVERY TIME? Yes WHAT STEPS HAVE YOU ALTERED? He probado a añadir el paso de desenmascaramiento antigénico y a variar las soluciones de bloqueo y de incubación del anticuerpo primario.

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Answer

Gracias por ponerte en contacto con nosotros y alertarnos del problema experimentado con nuestro producto. Por ello, puedo sugeriros algunas alternativas al protocolo seguido que en ocasiones mejoran los resultados del anticuerpo. De cualquier forma, al haber adquirido el producto en los últimos 6 meses, éste está cubierto por nuestra garantía Abpromise, que garantiza que si se han usado siguiendo las especificaciones de la datasheet, y el protocolo de utilización de los mismos es adecuado, os mandaremos un reemplazo del vial totalmente gratuito, un reembolso o un vale por el precio del producto. Estudiando vuestro protocolo, hay una serie de sugerencias que me gustaría plantearos para optimizar los resultados. Os agradecería mucho que me enviarais una imagen del tejido, para entender mejor el problema: Se ha usado el detergente Triton X100 para diluir los anticuerpos. Dado que la proteína target es una proteína de membrana, este detergente no es el más adecuado, pues destruye las membranas celulares. La datasheet especifica que este anticuerpo está testado en IHC en secciones embebidas en parafina. Vosotros habéis usado secciones congeladas, ¿os habéis planteado hacer el staining con secciones embebidas? Es posible que obtuvieseis mejores resultados. También os recomiendo usar un control positivo. Es muy útil para dilucidar la causa del problema. En este caso se recomienda utilizar tejido de bazo humano a tal propósito. ¿De qué especie procede el anticuerpo secundario? Es importante tener esto en cuenta cuando se usa suero como agente de bloqueo. Siempre se recomienda usar suero de la misma especie del anticuerpo secundario para bloquear, y así evitar uniones inespecíficas del mismo. ¿Habéis probado otras diluciones mas concentradas de anticuerpo primario, o métodos de ampliación de señal como método de detección (secundario biotinilado unido al complejo enzimático Avidina-biotina)? Otra posibilidad de optimización del protocolo es probar distintos tiempos de recuperación antigénica, pues demasiado tiempo puede llevar a una alteración en la morfología de la sección. Espero que estos consejos os ayuden a obtener mejores resultados. En caso contrario, por favor, no dudéis en volver a contactarnos.

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Please note: All products are "FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES"
For licensing inquiries, please contact partnerships@abcam.com

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