Overview

  • Product name
    Anti-HCV subtype 1b NS5B antibody
    See all HCV subtype 1b NS5B primary antibodies
  • Description
    Rabbit polyclonal to HCV subtype 1b NS5B
  • Host species
    Rabbit
  • Tested applications
    Suitable for: ELISA, WBmore details
  • Species reactivity
    Reacts with: Hepatitis C virus
  • Immunogen

    Recombinant fragment (Hepatitis C Virus) with a 21 amino acid C-terminal truncation

Properties

Applications

Our Abpromise guarantee covers the use of ab35586 in the following tested applications.

The application notes include recommended starting dilutions; optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

Application Abreviews Notes
ELISA Use at an assay dependent dilution.
WB 1/2000. Detects a band of approximately 64 kDa.

Target

  • Cellular localization
    Host cytoplasm, nucleus, mitochondrion, endoplasmatic reticulum; secreted.
  • Database links
    • Alternative names
      • Hepacivirin antibody
      • NS3P antibody
      • POLG_HCVBK antibody
      • Serine protease NS3 antibody

    Images

    • All lanes : Anti-HCV subtype 1b NS5B antibody (ab35586) at 1/2000 dilution

      Lane 1 : Lysate from Huh7 cells, mock transfection
      Lane 2 : Lysate from Huh7 cells transfected with NS5B

      Observed band size: 64 kDa
      why is the actual band size different from the predicted?

    References

    This product has been referenced in:
    • Zhao Q  et al. Dual Roles of Two Isoforms of Autophagy-related Gene ATG10 in HCV-Subgenomic replicon Mediated Autophagy Flux and Innate Immunity. Sci Rep 7:11250 (2017). Read more (PubMed: 28900156) »
    • Vegna S  et al. NOD1 Participates in the Innate Immune Response Triggered by Hepatitis C Virus Polymerase. J Virol 90:6022-35 (2016). Read more (PubMed: 27099311) »
    See all 14 Publications for this product

    Customer reviews and Q&As

    1-7 of 7 Abreviews or Q&A

    Answer

    Thank you for contacting us.

    The lab sent me the correct immunogen info:
    "Recombinant HCV (Hepatitis C Virus) NS5B with a 21 amino acid C-terminal truncation, genotype 1b, clone Con1, UniProt link
    http://www.uniprot.org/uniprot/?query=taxonomy:333284"

    We will update the datasheet accordingly.
    Here is the information about your free of charge replacement:
    I am sorry this product did not perform as stated on the datasheet and for the inconvenience this has caused. As requested, I have issued a free of charge replacement with the order number xxx with a new lot.
    To check the status of the order please contact our Customer Service team and reference this number.
    Please note that this free of charge replacement vial is also covered by our Abpromise guarantee. Should you still be experiencing difficulties, or if you have any further questions, please do not hesitate to let us know.
    I wish you the best of luck with your research.
    Free Rabbit monoclonal antibody with any purchase of a primary antibody, while stocks last! Quote “RABMAB-XBSMG” in your next primary antibody order. For more information, visit the following link: https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=15447

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    Question

    hier ist der ausgefüllte Fragebogen.
    Mit freundliche Grüssen,

    1) Abcam product code: ab100895
    2) Abcam order reference number or product batch number:
    3) Description of the problem: Nonspecific binding on Western blot, no specific bands with genotype 2A
    4) Sample preparation:
    Type of sample (whole cell lysates, fraction, recombinant protein…): whole cell lysate
    Lysis buffer: RIPA
    Protease inhibitors: PMSF, AEBSF, 104 mM, Aprotinin, 80 μM,Bestatin, 4 mM
    E-64, 1.4 mM, Leupeptin, 2 mM, Pepstatin A, 1.5mM
    Reducing agent:: SDS, 2-mercaptoethanol
    Boiling for ≥5 min? yes
    Protein loaded ug/lane: 70 µg
    Positive control: yes, HCV core / ns5a antibody staining
    Negative control: yes, uninfected cell lysate
    5) Percentage of gel
    Type of membrane: Hybond ECL
    Protein transfer verified: yes, marker is well transferred and other antibodies work well
    Blocking agent and concentration: 10% milk-TBST
    Blocking time: 1h
    Blocking temperature: RT
    6) Primary antibody (If more than one was used, describe in “additional notes”) : HCV NS5b, HCV Core, HCV NS5a
    Concentration or dilution 1:1000
    Diluent buffer: 1% milk-TBST
    Incubation time: over night
    Incubation temperature: 4°C
    7) Secondary antibody: goat-anti mouse HRP labeled
    Species: goat
    Reacts against: mouse
    Concentration or dilution 1:10000
    Diluent buffer: 1% milk-TBST
    Incubation time: 1h
    Incubation temperature: RT
    Fluorochrome or enzyme conjugate: HRP
    8) Washing after primary and secondary antibodies:
    Buffer: TBST
    Number of washes: 3 times
    9) Detection method: ECL
    10) How many times have you run this staining? 2x
    Do you obtain the same results every time? yes
    What steps have you altered to try and optimize the use of this antibody?
    Document attachment: Attaching images of your blot is strongly recommended and can greatly speed up our investigation of your problem.

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    Answer

    Vielen Dank dafür, dass Sie sich die Zeit genommen haben, unseren Fragebogen auszufüllen.



    Es tut mir leid, dass Sie Probleme mit unserem Antikörper hatten.

    Um Ihr Problem zu lösen, möchte ich die folgenden Vorschläge zu Veränderung Ihres Protokolls machen:

    1. Um eine Maskierung Ihres Zielproteins zu vermeiden, möchte ich vorschlagen, den Gehalt der Blocksubstanz auf maximal 5% abzusenken. Wie meine Kollegin schon anmerkte, haben wir die Erfahrung gemacht, dass BSA in vielen Faellen das bessere Blockmittel ist.

    2. Um die Nebenbanden abzuschwächen, mochte ich vorschlagen die Proteinladung auf 30 ug pro Bahn zu reduzieren: So sollte noch genügend Zielprotein vorhanden sein, allerdings wird die Möglichkeit der unspezifischen Bindungen reduziert.

    3. Leider wurden keine Angaben zum Gel gemacht: Handelt es sich um ein natives oder reduzierendes Gel? Die meisten unserer Antikörper wurden nur unter denaturierenden/ reduzierenden WB Bedingungen getestet. Ich möchte daher vorschlagen, ein reduzierendes Gel zu verwenden, falls Sie dies nicht schon tun.


    Bitte lassen Sie mich wissen, ob ich Ihnen helfen konnte. Wenn ein Antikörper nicht so funktioniert wie wir diesen auf unserem Datenblatt beschreiben, bieten wir unseren Kunden gerne einen kostenlosen Ersatz, eine Gutschrift oder eine Erstattung an, wenn das Produkt wie auf dem Datenblatt beschrieben behandelt und innerhalb von 180 Tagen nach Erhalt reklamiert wurde.

    Sie nicht, sich wieder bei uns zu melden, falls Sie weitere Fragen haben.




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    Answer

    Vielen Dank dafür, dass Sie nachhaken.

    Leider haben wir noch keine guten Nachrichten für Sie:

    Wie versprochen haben wir uns in den entsprechenden Laboren erkundigt. Bislang haben wir für unsere anti-HCV NS5B-Antikörper ab35586 und ab65410 in Erfahrung bringen können, dass sie leider NICHT mit Genotyp 2a kreuzreagieren. (Derzeit haben wir anti-NS3-Antikörper verfügbar, die gut mit Genotyp 2a-Isolaten funktionieren, falls das eine Alternative für Sie sein könnte: ab13830 oder ab65407).

    https://www.abcam.com/index.html?datasheet=13830 (or use the following: https://www.abcam.com/index.html?datasheet=13830).
    https://www.abcam.com/index.html?datasheet=65407 (or use the following: https://www.abcam.com/index.html?datasheet=65407).

    Im Moment warten wir noch auf die Rückmeldung bezüglich des NS5B-Antikörpers ab100895. Wir haben in der Vergangenheit schon versucht, in Erfahrung zu bringen, mit welchen Isolaten dieser Antikörper getestet wurde (siehe Scientific Support auf dem Datenblatt). Leider konnte das Labor bisher noch keine schlüssigen Informationen liefern, aber wir bleiben dran!

    Natürlich möchte ich Ihnen kein Produkt aufdrängen, aber wenn Sie nicht länger warten wollen oder können,wäre vielleicht unser 100% Abreview Rabatt für Sie interessant: Wenn Sie ab100895 mit Genotyp 2a-Isolaten testen möchten, können Sie zum Dank einen kostenlosen Primärantikörper Ihrer Wahl von uns erhalten. Im Austausch würden wir uns über ein Abreview für ab100895 freuen. Die Bedingungen zu unserem Testprogramm können Sie unter dem folgenden Link nachlesen: https://www.abcam.com/collaborationdiscount

    Vielen Dank für Ihre Geduld.

    Ich wünsche Ihnen ein schönes Wochenende!

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    Answer

    Thank you for contacting us. I am sorry for the delay in this response. ab100895 is a Mouse monoclonal antibody to Hepatitis C virus NS5B which has been used previously for ELISA and Western blotting. Unfortunately I have been unable to confirm if this antibody would recognise both 1b or 2a type. We do however have a further two antibodies against the same target: ab35586 and ab65410 which are both rabbit polyclonals which may also be suitable. These two antibodies have been tested for activity against  directly for their activity against genotypes 1a and 1b. Whilst other genotypes have not been tested being a polyclonal, it is expected to recognise other genotypes as well. I hope this information is helpful to you. Please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.

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    Application
    ELISA
    Sample
    Human Cell (huh-7 hepatocarcinoma cells)
    Specification
    huh-7 hepatocarcinoma cells
    Blocking step
    BSA as blocking agent for 2 hour(s) and 0 minute(s) · Concentration: 2% · Temperature: 37°C
    Type
    Sandwich (Capture)

    Abcam user community

    Verified customer

    Submitted Jun 17 2008

    Answer

    Thank you for your enquiry. I can confirm that this antibody works well with both 1a and 1b genotypes and also should work with many other genotypes as it is a polyclonal raised to an almost full-length protein. I hope this information is helpful to you. Should you have any further questions, please do not hesitate to contact us.

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    Answer

    Thank you for your patience. Regarding ab35586 (Hepatitis C virus NS5B antibody), this antibody will recognize genotype 1a. Please don't hesitate to contact us again if you have further questions.

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    Please note: All products are "FOR RESEARCH USE ONLY AND ARE NOT INTENDED FOR DIAGNOSTIC OR THERAPEUTIC USE"

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