HRP Anti-bacterial Luciferase antibody (ab390)

Muchas gracias por enviarnos el cuestionario relleno y las imágenes.

Lamento muchísimo que el anticuerpo no os haya dado buenos resultados, y después de haber estudiado el protocolo enviado me gustaría haceros algunas sugerencias para intentar mejorarlos.

En caso de que no se consiga obtener el resultado esperado del anticuerpo, al estar éste aun en garantía puesto que se adquirió hace menos de 6 meses, estaré encantada de mandaros un reemplazo del mismo (de un lote diferente, o bien de otro anticuerpo si lo hubiera disponible contra la misma proteína), devolveros el dinero, o haceros un vale sin caducidad para una futura compra.

Para intentar obtener tan solo la banda correspondiente a la proteína de interés, yo sugeriría las siguientes pautas:

-Usar buffer RIPA para lisar las células, es el que solemos usar en el laboratorio y nos da buenos resultados para detectar proteínas desnaturalizadas.

- Cargar menos cantidad de proteína por calle. Entre 10-15ug podría ser una buena cantidad.

- Bloquear durante un periodo mayor de tiempo puede ayudar a disminuir bandas inespecíficas. Incluso probad con 5% BSA durante 2 horas.

-Probar diluciones mayores de ambos anticuerpos, por ejemplo 1/1500 para el primario.

-También es importante, en casos en los que se obtienen varias bandas, llevar a cabo un control no primario. Es decir, incubar el anticuerpo secundario solo, sin primario, y comprobar que no generan ninguna banda en la membrana.

Espero haberos ayudado. Si necesitáis cualquier otra información o ayuda, por favor, no dudéis en contactarnos de nuevo, y desde luego, si el anticuerpo sigue sin funcionar como debiera, te ruego que nos vuelvas a escribir para poder solucionar este problema lo más rápido y eficazmente posible.

Confió en que estas recomendaciones mejoren el resultado. En caso contrario, por favor, no dudéis en contactarme de nuevo.

Gracias por tu respuesta.

Es difícil evaluar la procedencia de las bandas sin más información.

Te agradecería que me mandaras los pesos moleculares en la imagen, así como información acerca del protocolo seguido.

Te adjunto un cuestionario que se rellena en pocos minutos, y que será de gran ayuda para interpretar las bandas inespecíficas.

Nuestra garantía Abpromise garantiza que los productos funcionan tal y como se especifica en su ficha técnica, y en caso contrario, estaremos encantados de ofrecer soporte científico que ayude a mejorar los resultados. Si aun así el producto sigue sin funcionar correctamente, y éste se adquirió en los últimos seis meses, estaremos encantados de reemplazar o reembolsar el valor del anticuerpo.

Gracias por tu comprensión, y quedo a la espera de tu respuesta.

Thank you for contacting us.

This antibody ab390 is produced against whole protein. It is not produced against a single epitope.

I am very sorry I couldn’t help you further. Please do not hesitate to contact us if you need any other advice or information.

Gracias por contactarnos y facilitarnos los detalles y las imágenes.

Lamento mucho que estéis teniendo problemas con este anticuerpo. Atendiendo a las imágenes enviadas, y siendo que el vial de anticuerpo se envió en el 2010 es posible que este se haya degradado. Además como mencionas los resultados han variado desde su primer uso hasta hoy. ¿Cómo se ha almacenado el anticuerpo? ¿Ha sufrido distintos ciclos de congelación / descongelación? ¿Los buffers usados eran frescos?

Si os interesa puedo enviaros un cuestionario que recoge los pasos principales en un ensayo de WB para tratar de entender qué ha ocurrido, pero en este caso me temo que es muy posible que se deba a la degradación del anticuerpo.

Yo os animaría a que probarais el nuevo anticuerpo enviado, y que éste se almacene a 4C (si se va a usar todo de inmediato) o a -20C o -80C si se va a usar más a largo plazo. En este último caso se aconseja además alicuotar el anticuerpo para evitar los ciclos de congelación/descongelación.

Si al testar este nuevo anticuerpo recibido tuvierais el mismo problema, no dudéis en contactarnos de inmediato. De cualquier forma, quedo a la espera de tu respuesta para que me indiques como deseáis proceder.

Thank you for your enquiry. All the information that we have regarding this antibody is located on the online datasheet. Ab390 cross-reacts with Photobacterium fischerii.

Dear Shankar I am afraid that we don't have any references for the use of this antibody in immunohistochemistry. Perhaps if you give us some more details on the problems then we might be able to help.

Luciferase from photobacterium fischerii gives a 40 kDa band, but the band size of bacterial luciferases from other species are unknown to us.

This antibody reacts with bacterial luciferase (Photobacterium fischerii)showing an 80kDa band under non-reducing conditions and a 40kDa band under reducing conditions of SDS-PAGE.