epitope, 친화도 및 fluorescence 태그의 차이점

태그의 비밀 풀기: epitope, 친화도, fluorescence 태그

퓨전 태그는 크게 세 가지 범주로 나뉘며, 각각 다른 용도로 사용됩니다: epitope 태그, affinity tag, fluorescence 태그입니다.

• Epitope 태그 는 일반적으로 Western blot이나 co-immunoprecipitation과 같은 면역학적 응용 분야에 사용될 수 있는 짧은 peptide 서열인 경향이 있습니다.
• affinity tag 는 일반적으로 길이가 더 길며, 단백질 정제나 단백질 용해도 향상에 사용됩니다.
• 형광 표지자 은 살아있는 세포와 사멸한 세포 모두에서 사용할 수 있으며, 주로 세포 내 국소화 및 공동 발현 실험과 같은 영상 연구에 널리 활용됩니다.

C 대 N: 어떤 터미널을 선택할까?

관심 있는 단백질의 C 말단이나 N 말단에 태그를 접합할지 여부는 주로 단백질 자체, 즉 단백질이 어떻게 접히는지와 선택한 말단이 기능적으로 필요한지 여부에 따라 결정됩니다. 예를 들어, C-말단이 단백질 내부로 접혀 있다면 융합 단백질 신호를 감지하기 어려울 것이며, 또는 태그가 융합된 말단에서 단백질이 번역 후 절단된다면, 관심 대상 단백질에서 태그가 제거될 것입니다.

자원이 충분하거나 실험이 독창적인 경우, C-말단 및 N-말단 태그가 부착된 두 가지 구축체를 모두 클로닝하여 가장 적합한 방법을 결정하는 것이 가장 좋을 수 있습니다. 한 연구팀은 C-말단 융합 단백질이 N-말단 태그가 부착된 융합 단백질보다 의도된 세포 내 구획에 더 많이 국소화된다는 사실을 밝혀냈다. 그러나 C-말단에 태그가 부착된 단백질은 대개 예상대로 국소화되고 행동하는 경향이 있지만, 이를 항상 예측할 수 있는 것은 아니라는 점을 강조할 필요가 있다. immunofluorescence를 통해 융합 단백질이 올바른 위치에 국한되어 있는지 확인할 수 있으며, Immunoblot을 통해 융합 단백질이 올바른 크기를 가지며 예상된 수준으로 발현되는지 확인할 수 있고, co-immunoprecipitation을 통해 융합 단백질이 알려진 기질과 어떻게 상호작용하는지 평가할 수 있습니다.

참고 문헌