Overview

  • Product name
    Anti-mtTFA antibody [18G102B2E11] - Mitochondrial Marker
    See all mtTFA primary antibodies
  • Description
    Mouse monoclonal [18G102B2E11] to mtTFA - Mitochondrial Marker
  • Host species
    Mouse
  • Tested applications
    Suitable for: IHC-P, WB, In-Cell ELISA, Flow Cyt, ICC/IFmore details
  • Species reactivity
    Reacts with: Human
    Does not react with: Mouse, Rat
  • Immunogen

    Human, full-length (minus the N-terminal mitochondrial targeting sequence)

  • Positive control
    • IHC-P: human liver FFPE tissue sections
  • General notes

    This antibody clone is manufactured by Abcam.

    Product was previously marketed under the MitoSciences sub-brand.

    If you require this antibody in a particular buffer formulation or a particular conjugate for your experiments, please contact orders@abcam.com or you can find further information here.

Properties

Applications

Our Abpromise guarantee covers the use of ab119684 in the following tested applications.

The application notes include recommended starting dilutions; optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

Application Abreviews Notes
IHC-P Use a concentration of 5 µg/ml. Perform heat mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.
WB Use a concentration of 1 µg/ml. Predicted molecular weight: 29 kDa.
In-Cell ELISA Use a concentration of 1 µg/ml.
Flow Cyt Use a concentration of 1 µg/ml.

ab170192 - Mouse monoclonal IgG2b, is suitable for use as an isotype control with this antibody.

ICC/IF Use a concentration of 1 µg/ml.

Target

  • Function
    Binds to the mitochondrial light strand promoter and functions in mitochondrial transcription regulation. Required for accurate and efficient promoter recognition by the mitochondrial RNA polymerase. Promotes transcription initiation from the HSP1 and the light strand promoter by binding immediately upstream of transcriptional start sites. Is able to unwind and bend DNA. Required for maintenance of normal levels of mitochondrial DNA. May play a role in organizing and compacting mitochondrial DNA. target DNA. Interacts with TFB1M and TFB2M.
  • Sequence similarities
    Contains 2 HMG box DNA-binding domains.
  • Cellular localization
    Mitochondrion.
  • Information by UniProt
  • Database links
  • Alternative names
    • anscription factor 6-like 1 antibody
    • Mitochondrial transcription factor 1 antibody
    • mitochondrial transcription factor A antibody
    • MtTF1 antibody
    • mtTFA antibody
    • TCF 6 antibody
    • TCF-6 antibody
    • TCF6 antibody
    • TCF6L1 antibody
    • TCF6L2 antibody
    • TCF6L3 antibody
    • TFAM antibody
    • TFAM_HUMAN antibody
    • Transcription factor 6 antibody
    • Transcription factor 6 like 2 (mitochondrial transcription factor) antibody
    • Transcription factor 6 like 2 antibody
    • Transcription factor 6-like 2 antibody
    • transcription factor 6-like 3 antibody
    • Transcription factor A, mitochondrial antibody
    • Transcription factor A, mitochondrial antibody
    • Transcription factor A, mitochondrial precursor antibody
    see all

Images

  • All lanes : Anti-mtTFA antibody [18G102B2E11] - Mitochondrial Marker (ab119684) at 1 µg/ml

    Lane 1 : recombinant mtTFA (ab103784) at 0.025 µg
    Lane 2 : HeLa whole cell lysate at 30 µg

    Secondary
    All lanes : HRP-conjugated Goat polyclonal to mouse IgG at 1/5000 dilution

    Predicted band size: 29 kDa

  • Immunocytochemistry image of ab119684 stained human HDFn cells. The cells were paraformaldehyde fixed (4%, 20 min) and Triton X-100 permeabilized (0.1%, 15min). The cells were incubated with the antibody (18G102B2E11, 1µg/ml) for 2h at room temperature. The secondary antibody was (green) 488 goat anti-mouse IgG (H+L) used at a 1/1000 dilution for 1h. 10% Goat serum was used as the blocking agent for all blocking steps. DAPI was used to stain the cell nuclei (blue). mtTFA localizes to the mitochondria.
  • HeLa cells were stained with 2 µg/mL mtTFA antibody (ab119684) (blue) or an equal amount of an isotype control antibody (red) and analyzed by flow cytometry.
  • IHC image of mtTFA staining in human liver HCC formalin fixed paraffin embedded tissue section, performed on a Leica BondTM system using the standard protocol F. The section was pre-treated using heat mediated antigen retrieval with sodium citrate buffer (pH6, epitope retrieval solution 1) for 20 mins. The section was then incubated with ab119684, 5µg/ml, for 15 mins at room temperature and detected using an HRP conjugated compact polymer system. DAB was used as the chromogen. The section was then counterstained with haematoxylin and mounted with DPX.

    For other IHC staining systems (automated and non-automated) customers should optimize variable parameters such as antigen retrieval conditions, primary antibody concentration and antibody incubation times.

References

This product has been referenced in:
See all 13 Publications for this product

Customer reviews and Q&As

1-4 of 4 Abreviews or Q&A

Application
Western blot
Sample
Human Tissue lysate - whole (Muscle)
Gel Running Conditions
Reduced Denaturing (12%)
Loading amount
15 µg
Specification
Muscle
Blocking step
Milk as blocking agent for 1 hour(s) and 0 minute(s) · Concentration: 5% · Temperature: 25°C

Abcam user community

Verified customer

Submitted Jul 10 2015

Question

The samples are prepared from schwann cells and DRG neurons and pancreatic cancer cell lines (one human, one rat origin, one mouse origin ) we chose the antibodies according to the reactivity mentioned on the abcam data sheet and the lysates were prepared using a non denaturing lysis buffer, aliquoted and stored at -80 degrees centigrade. I use 10% and 12.5% acrylamide gels depending on the molecular weight of the protein. initially 40 ug protein was loaded and the gels were run at 70 volts and transfered on to PVDF membrane (ice cold). All buffers were prepared as suggested in the western blot guide by Abcam. 5% milk was used to block the membrane, washed thrice with TBST and/ or TBS. Incubated with respective antibodies (initially 1: 1000 dilution) overnight in cold room with agitation. The blots were added with secondary antibody the following day (secondary antibody from abcam (ab97023 and ab97051 which were aliquoted and stored at -20 degrees centigrade) incubated for 1 hour at room temperature and then washed thrice with TBS/and or TBST. probed with chemiluminescent solution from Biorad. Bands were not detected. We tried loading 50ug protein (we cannot load more owing to the limited volumes of sample we have and the nature of the project) and then tried using 1:500 and 1:250 dilutions, but still the antibodies were not working. We have been using this protocol and works fine with all the other abcam antibodies. Please let me know if I need to elaborate on any of these steps.

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Answer


Upon reviewing your protocol, it is troubling to me that all 4 of these antibodies are not working. While it is conceivable that all four antibodies are not performing properly, typically when multiple antibodies are not working it is an issue with sample preparation, membrane transfer, or the detection substrate. In your case, I think the following troubleshooting steps are the most worth your while attempting, with tip 1 being the first thing you try since it is the most likely to make the targets recognizable by the antibodies:
1. You mentioned your samples were non-denatured. ab2571, ab32124, and ab81212 were all raised against synthetic peptides and will require linear proteins in order to recognize their epitopes. Thus, your samples should be both reduced and denatured (SDS and beta-mercaptoethanol or DTT) and boiled for 5 minutes at 100C prior to freezing at -20C. RIPA buffer is a good choice for mitochondrial and membrane proteins such as these.
2. To enrich the target proteins, have you considered a mitochondria isolation kit such as ab110170 (https://www.abcam.com/Mitochondria-Isolation-Kit-for-Cultured-Cells-ab110170.html)?
3. Have you insured that the proteins are being transferred with a reversible stain such as Ponceau S? Since you are using PVDF, make sure to pre-soak the membrane in MeOH, then in transfer buffer.
4. If you are including milk in your antibody dilutions try removing milk or reducing to 0.5% milk for the antibody dilutions only.
Further troubleshooting tips, including no signal specific tips, are included through the link below:
https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11352
Please let me know the results of troubleshooting, especially step 1. I look forward to your reply and sincerely hope this information helps.

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Question

1) Code du produit Abcam ab119684

2) Numéro de commande Abcam ou le numéro de lot/batch xx Description du problème Bande située à 29Kda au lieu des 20KDa indiqués

4) Préparation de l’échantillon :

Type d’échantillon (lysat cellulaire, fraction, protéine recombinante …) :

Tampon de lyse 50mM TRISHCL / 150mM NaCl / 0.5% NP / 0.25% Sodium Deoxycolate / 0.1% SDS

Inhibiteurs de protéases 1mM PMSF + Complete mini 1X (Roche 11836153001)

Inhibiteurs de phosphatases NON

Agent réductant Laemli 1X final

95oC pendant ≥5 min? oui/non OUI

Protéine/puits en mg ou nombre de cellules/puits 25µg

Contrôle positif NON

Contrôle négatifxx

5) Pourcentage du gel Stacking: 4% / Separating: 12%

Type de membrane PVDF

Vérification du transfert NON

Tampon de saturation et concentration Lait 5% en TBS-Twenn

Temps d’incubation de la saturation 1 Heure

Température de saturation Température ambiante (environ 24°c)

6 Anticorps primaire (utilisation de plusieurs anticorps, description dans “notes supplémentaires”) :

Concentration ou dilution 1/1000

Tampon diluant TBS-Tween + 0.1% lait

Temps d’incubation 1 Heure

Température Incubation Température ambiante (environ 24°c)

7) Anticorps secondaire :

Espèce

Réagit contre Mouse

Concentration ou dilution 1/15000

Tampon de dilution TBS-Tween

Temps d’incubation 1 Heure

Température d’incubation Température ambiante (environ 24°c)

Fluorochrome or enzyme conjuguée Peroxydase

8) Lavage après les anticorps primaire et secondaire :

Tampon TBS-Tween

Nombre de lavage 3 fois

Temps d’incubation du lavage 5 minutes

9) Méthode de détection: ECL + (Ge Healthcare RPN 2132)

10) Combien de fois avez vous essayer ce Western Blot ? environ 6 fois

Obtenez-vous toujours le même résultat ? OUI

Quelle étape avez vous optimisée ?

Aucune, car, même si elle n’est pas située au poids apparent attendu, c’est la seule bande apparaissant sur le film…

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Answer

Merci d'avoir pris le temps de remplir notre questionnaire et de nous avoir contactés. Je suis désolée que vous avez des problèmes avec l'interprétation de deux de nos anticorps.

Comme expliqué auparavant, notre politique est d'offrir tout d'abord la meilleure assistance technique. Si jamais nous concluons que le produit que vous avez reçu ne fonctionne pas comme mentionné sur sa fiche technique et que ce produit a été commandé sous 180 jours, nous nous ferons un plaisir de vous offrir un remplacement gratuit ou un avoir en compensation.

J'aimerais donc vous offrir quelques suggestions afin d'optimiser vos résultats. J'apprécierais si vous pouviez confirmer quelques détails de la procédure.

1.) Comme écrit dans mon premier émail, est-ce que vous avez vérifié que le tampon du migration est compatible/adapté au marquer de poids? Effectivement, suivant le tampon, l'échelle dans le tampon peux varier beaucoup. Pour illustration, je peux vous recommander de voir l'image comparative d'un de nos marqueurs en différents tampons: Click here (or use the following: https://www.abcam.com/index.html?datasheet=115832).

2.) Il existent deux isoformes du mtTFA. Celles-ci sont décrites dans la base de données SwissProt chez la souris: http://www.uniprot.org/uniprot/P40630 La deuxième isoforme a un poids moléculaire attendu de 25kD et est appelé isoforme nucléaire.

3.) Je peux vous conseiller de tester des autres cellules, comme les cellules Hela, en parallèle comme test. Ceci afin d'exclure que dans les fibroblastes une nouvelle isoforme soit exprimé.

4.) Est-ce que vous pouvez confirmer aussi que vous avez utilisé des extrait totaux?

J'espère que ces informations vous aideront. Si nos suggestions ne permettent pas d'améliorer vos résultats, n'hésitez pas à me recontacter pour plus d'assistance.

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Answer

Je suis désolée d'apprendre que ces anticorps ne vous donnent pas de résultats satisfaisants en Western blot - c.à.d. une bande à environ 42kD pour SURF1 et à environ 24kD pour mtTFA).
Nous n'avons pas eu des autres retours négatives et n'avons pas non plus eu des indications autres d'un problème avec ces anticorps. Nous n'avons pas non plus eu des feedback autres des gens utilisant ces anticorps sur des cellules similaires.
Comme la qualité de nos produits est très imporante pour nous, nous aimerions bien investiguer en plus de profondeur le problème que vous avez avec ces anticorps. Veuillez pour ceci nous fournir un peu plus d'information s'il vous plaît. Pour ceci je vous ai joint un questionnaire qui nous permet de regrouper le plus d'informations possible sur le protocole que vous avez utilisé avec cet anticorps..
En regardant les informations que vous nous aviez déjà envoyé, j'aimerai bien noter les points suivants:
1.) Est-ce que vous avez vérifié que le tampon du migration est compatible/adapté au marquer de poids? Effectivement, suivant le tampon, l'échelle dans le tampon peux varier beaucoup. Pour illustration, je peux vous recommander de voir l'image comparative d'un de nos marqueurs en différents tampons: Click here (or use the following: https://www.abcam.com/index.html?datasheet=115832).
2.) Il existent deux isoformes du mtTFA. Celles-ci sont décrites dans la base de données SwissProt chez la souris: http://www.uniprot.org/uniprot/P40630 La deuxième isoforme a un poids moléculaire attendu de 25kD et est appelé isoforme nucléaire.
Je me réjouis de recevoir votre réponse avec les informations additionnelles afin de pouvoir continuer à investiguer ce problème.
Si nous concluons que notre produit est fautif et ne fonctionne pas comme explicité par notre fiche technique, nous serons ravis de mettre en place l'envoi d'un tube de remplacement gratuit ou d'un remboursement (sous réserve d'une commande ultérieure de 180 jours).

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Please note: All products are "FOR RESEARCH USE ONLY AND ARE NOT INTENDED FOR DIAGNOSTIC OR THERAPEUTIC USE"

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