Question (41565) | Anti-mtTFA antibody [18G102B2E11] - Mitochondrial Marker (ab119684)

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Question

Nous avons récemment testé deux références d’anticorps :
1. Anti-Surf1 antibody [21H2BG4] (ab110256)
2. Anti-mtTFA antibody [18G102B2E11] (ab119684)
Pour ces deux références, nous avons bien obtenu une ou plusieurs bande(s). Mais aucune bande prédominante située au poids moléculaire attendu (Voir le .pdf joint)
Tous nos WB ont été fait à partir d’extraits protéiques issus de Fibroblastes humains.

En ce qui concerne SURF1, nous somme en possession de cellules de patients mutés dans pour cette protéine. Je vous présente leurs résultats dans le .pdf. Certains d’entre eux voient la bande (au mauvais poids moléculaire) disparaître, mais pas tous…Est-ce bien cette bande ? car il n’y aucune bande au poids moléculaire attendu. Il est dit dans la fiche technique que la quantité de la protéine SURF1 est faible dans les cellules.
Pour mtTFA, nous n’avons aucun moyen de vérifier que cette bande est bien la bonne. Hormis le fait que cette bande est de loin prédominante sur les autres et que ses variations vont dans le sens de notre hypothèse… ce qui est un peu juste

Auriez-vous eu quelques échos de personnes travaillant avec ces anticorps sur le même matériel cellulaire, c'est-à-dire fibroblastes humains ?
Ont-il observé ces mêmes différences ?
Vous a-t-on fait remarqué ces différences dans d’autres types cellulaire ?

Answer

Je suis désolée d'apprendre que ces anticorps ne vous donnent pas de résultats satisfaisants en Western blot - c.à.d. une bande à environ 42kD pour SURF1 et à environ 24kD pour mtTFA).
Nous n'avons pas eu des autres retours négatives et n'avons pas non plus eu des indications autres d'un problème avec ces anticorps. Nous n'avons pas non plus eu des feedback autres des gens utilisant ces anticorps sur des cellules similaires.
Comme la qualité de nos produits est très imporante pour nous, nous aimerions bien investiguer en plus de profondeur le problème que vous avez avec ces anticorps. Veuillez pour ceci nous fournir un peu plus d'information s'il vous plaît. Pour ceci je vous ai joint un questionnaire qui nous permet de regrouper le plus d'informations possible sur le protocole que vous avez utilisé avec cet anticorps..
En regardant les informations que vous nous aviez déjà envoyé, j'aimerai bien noter les points suivants:
1.) Est-ce que vous avez vérifié que le tampon du migration est compatible/adapté au marquer de poids? Effectivement, suivant le tampon, l'échelle dans le tampon peux varier beaucoup. Pour illustration, je peux vous recommander de voir l'image comparative d'un de nos marqueurs en différents tampons: Click here (or use the following: https://www.abcam.com/index.html?datasheet=115832).
2.) Il existent deux isoformes du mtTFA. Celles-ci sont décrites dans la base de données SwissProt chez la souris: http://www.uniprot.org/uniprot/P40630 La deuxième isoforme a un poids moléculaire attendu de 25kD et est appelé isoforme nucléaire.
Je me réjouis de recevoir votre réponse avec les informations additionnelles afin de pouvoir continuer à investiguer ce problème.
Si nous concluons que notre produit est fautif et ne fonctionne pas comme explicité par notre fiche technique, nous serons ravis de mettre en place l'envoi d'un tube de remplacement gratuit ou d'un remboursement (sous réserve d'une commande ultérieure de 180 jours).

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