Anti-Oct4 antibody (ab18976)

Thank you and your customer for taking the time to complete our questionnaire and contact us. I am sorry to hear your customer has had difficulty obtaining satisfactory results from this antibody. The details your customer has kindly provided will enable us to investigate this case for your customer and this is also helpful in our records for monitoring of quality.
Although the other antibody has worked well using this procedure, individual antibodies will often require optimization especially if the target is different. I would like to offer some suggestions to help optimise the results from ab18976.
1.) I can recommend to add a permeabilization step to the protocol. Oct4 is in the nucleus. The following detergents can be used: Triton or NP-40 Use 0.1 to 0.2% in PBS for 10 min only. These will partially dissolve the nuclear membrane and are therefore very suitable for nuclear antigen staining.
2.) Oct4 is expressed in developing brain. Highest levels are found in specific cell layers of the cortex, the olfactory bulb, the hippocampus and the cerebellum. Highly expressed in undifferentiated embryonic stem cells and expression decreases gradually after embryoid body (EB) formation. Since there is only a low level of expression in adult tissues, I suggest to run a positive control.
I would also appreciate if your customer can confirm some details of the procedure.
1.) What tissues and cells were used?
2.) What does it urea mean as antigen retrieval step?
3.) What cells are shown in the images?
We are happy to offer this technical support. In the event that a product is not functioning in the applications cited on the product data sheet (and the problem has been reported within 6 months of purchase), we will be pleased to provide a credit note, free of charge replacement or refund.
I hope this information is helpful, thank you and your customer for your cooperation. Should the suggestions not improve the results, please do not hesitate to contact me again with the further requested details.

Thank you for your enquiry and your interest.

I can confirm that two isoforms of Oct 4 have been identified, and the exact amino acid sequences (aa) can be found at this website: http://www.uniprot.org/uniprot/Q01860

- Isoform A: Q01860-1 (1-360 aa)

- Isoform B: Q01860-2 (1-265 aa)

ab109183 - this antibody was raised against a peptide corresponding to the region between 265-360 aa, soit is very likely to recognize Isoform A.

ab18976 - the immunogen selected was around region 1-14 aa, thus it would recognize potentially both Isofm A and B.

If you need any further assistance in the future, please do not hesitate to contact me.

Muchas gracias por tu respuesta.

Es importante que todos los anticuerpos que escojas para llevar a cabo IHC-P en tejido humano estén validados (y por tanto garantizados por Abcam) para funcionar en esta especie y aplicación. Esta información aparece en la hoja técnica de los productos.

También es importante echar un vistazo a las hojas de datos de cada uno de los productos para tener en cuenta recomendaciones especificas, tales como diluciones, métodos de recuperación antigénica, y demás que pueden aparecer en ellas. A las fichas técnicas se puede acceder desde la página web, escribiendo el código del anticuerpo (ab955, por ejemplo) en la casilla azul en la parte de arriba de nuestra página web (https://www.abcam.com/).

Desconozco las combinaciones que queréis llevar a cabo mediante inmunofluorescencia doble con los anticuerpos mencionados. En general, a la hora de hacer inmunoensayos múltiples hay que tener mucha precaución para evitar reactividad cruzada. Es importante usar anticuerpos procedentes de distintas especies si se puede, o al menos con diferentes isotipos. Una buena forma de evitar reactividad cruzada es usando secundarios de la misma especie. Además esto permite usar suero de dicha especie para bloquear.

Te copio los links a los protocolos que tenemos en nuestra web para llevar a cabo doble inmunofluorescencia por s pudieran resultar de ayuda:

https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11459

https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11458

De todas maneras si quieres que comentemos distintas posibilidades y escenarios posibles, no dudes en contactarme otra vez.

Respecto a los secundarios, tenemos muchos anticuerpos que podrían serviros. Te aconsejo que en función de los primarios y combinaciones que vayáis a llevar a cabo, optéis por uno u otro. Para llevar a cabo la búsqueda de los secundarios desde la pagina web (https://www.abcam.com/) pincha en la pestaña “Secondary Antibodies”. Se abre una nueva ventana de “Advance Search”, en la cual se pueden elegir las categorías requeridas. La única categoría obligatoria es el isotipo del anticuerpo, pues tiene que coincidir con el del primario. El resto de categorías son opcionales, pero son muy útiles para afinar la búsqueda y elegir el anticuerpo más apropiado según la especie del primario, la conjugación deseada, la clonalidad, la aplicación en la que se va a testar, etc…

Los precios y la disponibilidad pueden consultarse igualmente en la parte superior de la datasheet de los productos. Si necesitas un presupuesto no dudes en hacérmelo saber para que te lo envíe. Además tenemos algún descuento para pedidos superiores a 5 productos, por lo que si vais a realizar un pedido de estas características te animaría a que nos contactaras primero.

Espero que esta información sea de ayuda. Como te digo, para cualquier aclaración o más sugerencias, estaré encantada de echar una mano.

Thank you for contacting us.

Please advice customer to consult publication whole selecting the antibodies.

HEK293T cells do not express c-Myc and Oct4. They express SOX2.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1289416/

Human embryonic fibroblasts have basal level of Oct4 and Sox2 proteins. You may need to induce the expression of these proteins.

http://sklrm.shsmu.edu.cn/manage/edit/UploadFile/200982102734474.pdf

c-myc is also OK in HEF cells; http://www.pnas.org/content/106/31/12759.full

I hope this information is helpful to you. Please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.

Thank you very much for your email. I apologize for this confusion. Unfortunately I do not know where it comes from. I can however confirm that the immunogen used for this antibody is from amino acid 1 to 14. The sequence is AGHLASDFAFSPC. I hope this information is helpful. Please do not hesitate to contact us again should you have any other question or concern.