pan Caspase (active) FITC Staining Kit (ab65611)

Gracias por tu respuesta.

Me alegra saber que estas interesada en probar la presencia de caspasa 3 en tus células.

Nosotros podemos mandarte como algo excepcional un anticuerpo gratuito contra Caspasa 3, el ab2302. Normalmente son los usuarios los que tienen que determinar la presencia de antígeno en sus muestras, pero ya le digo que como algo un poco especial, puedo mandarle de forma gratuita el anticuerpo primario.

En nuestro catálogo encontrará anticuerpos secundarios compatibles (dígame si necesita ayuda para encontrar uno especifico), y soluciones de bloqueo para llevar a cabo el ensayo, pero me temo que estos reactivos no me permiten facilitárselos de forma gratuita, tendría usted que abonarlos. Alternativamente podría hacerle un descuento del 50% en la compra del anticuerpo primario + el secundario.

Si no le interesa esta opción, puede tratar de determinar la presencia de caspasa en sus muestras por otros medios. Lo importante es que averigüemos si el kit no detecta la proteína debido a un problema en el tratamiento de las muestras, o por otras razones. En estos casos donde el protocolo del kit es tan directo, normalmente los problemas residen en el tratamiento de las muestras.

Puede echar también un vistazo a nuestros protocolos en la web sobre apoptosis, quizás le sirvan de ayuda para inducir apoptosis en sus células por otros medios y verificar la presencia de enzimas.

https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11370

https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11368

Dígame como quiere que procedamos para intentar solucionar este problema. Quedo a su disposición si necesita información adicional.

Gracias por enviarnos de nuevo los resultados obtenidos.

He estudiado el protocolo seguido y los resultados enviados, y me gustaría, antes de determinar que el kit estaba defectuoso, proponerle que lleven a cabo un ensayo para confirmar que el tratamiento seguido para inducir apoptosis en las células es el adecuado, y por tanto hay presencia de caspasas en las células para ser detectadas por el kit.

Si tienen un método para comprobar que realmente se ha inducido apoptosis, le animo a que lo pruebe, y comparta el resultado con nosotros.

En caso de que no tenga manera de llevar a cabo esta determinación, le puedo proponer una pequeña prueba. Si le parece, le propongo que lleve a cabo una tinción celular, una inmunofluorescencia con las células, para detectar la presencia de caspasa 3 en ellas. Esta caspasa es la más común en células que sufren apoptosis, por lo que si el tratamiento que ha llevado a cabo con sus células fue el adecuado, entonces el anticuerpo anti-Caspasa 3 deberá detectarlo.

Si tienen ustedes los medios para llevar a cabo una inmunofluorescencia con sus células, indíquemelo, y le mandaré un anticuerpo de forma gratuita para que lo pruebe y determine la presencia (o ausencia) de la proteína. Asegúrese de que tiene el anticuerpo secundario para ejecutar el experimento.

Puede ver los detalles del anticuerpo primario que le comento en su datasheet:

https://www.abcam.com/active-Caspase-3-antibody-ab2302.html

Le mando el link al protocolo que tenemos en nuestra web para llevar a cabo ICC/IF, por si no tuvieran experiencia previa:

https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11417

Así pues, si está interesada, le envío el anticuerpo, usted realiza el staining sobre las mismas muestras que ha usado con el kit (aquellas que han sido tratadas con extracto PP y taxol), y nos remite los resultados y las imágenes obtenidas. Es importante que me indique si tiene los medios para llevar a cabo el ensayo (anticuerpo secundario, microscopio de fluorescencia, solución de bloqueo, etc…).

Si el anticuerpo detecta la presencia de caspasa 3 en las células, es posible que el problema provenga entonces del kit, pero antes hay que comprobarlo. Espero entonces su respuesta para que me indique como proceder, y quedo a su disposición por si tuviera cualquier otra consulta.

Muchas gracias por contactarnos. Encontrará sus respuestas a continuación: ¿Se puede utilizar en líneas celulares murinas y humanas? Este kit es compatible con muestras de mamíferos, por lo que es válida para su uso en muestras precedentes de humano y de ratón. ¿Es necesario permeabilizar las células antes de realizar el ensayo? No es necesario llevar a cabo la permeabilización de las células. Nosotros vamos a realizar el análisis por citometría de flujo. ¿Existe alguna indicación para la interpretación de los datos? Los resultados se interpretan comparándolos con la muestra control no inducida. Las siguientes publicaciones hacen referencia a este kit y quizas puedan resultar de ayuda: Abdel-Latif, L. et al. (2006) J. Gen Virol. 87: 2539-2548. Alajiz N et al (2008) Clin. Cancer Res. 14: 4891-4897. Bahl, K. et al. (2006) J. Immunol. 176: 4284-4295. Cho SH et al (2009) Blood; 10.1182/blood-2008-03-144121. Magari, M. et. al. IL-21–Dependent B Cell Death Driven by Prostaglandin E2, a Product Secreted from Follicular Dendritic Cells. J. Immunol., Oct 2011; 187: 4210 - 4218. Ohshima, S. (2006) Ann. N.Y. Acad. Sci. 1067: 228-234. William, J., et al. (2005) J. Immunol. 174: 6879-6887. Yagi T et al. (2008) PNAS 105: 979 - 984. Zhang, T. et al. The Pleckstrin Homology Domain Adaptor Protein Bam32/DAPP1 Is Required for Germinal Center Progression. J. Immunol. 2010; 184: 164-172.   ¿Este kit detecta todas las caspasas activas o solo algunas específicas? Este kit detecta principalmente Pan-Caspasa. Tenemos otros kits en el catálogo que detectan caspasas específicas. Si necesitas más información al respecto, estaré encantada de poder ayudar.   Espero que esta información sea de utilidad. Si tiene cualquier otra consulta, por favor, no dude en consultarnos.