Overview

  • Product name

    Rat IL-1 beta ELISA Kit
    See all IL-1 beta kits
  • Detection method

    Colorimetric
  • Sample type

    Cell culture supernatant, Serum, Plasma
  • Assay type

    Sandwich (quantitative)
  • Sensitivity

    < 80 pg/ml
  • Range

    68.59 pg/ml - 50000 pg/ml
  • Recovery

    99 %

    Sample specific recovery
    Sample type Average % Range
    Cell culture supernatant 92.89 81% - 109%
    Serum 107.2 95% - 115%
    Plasma 97.55 89% - 108%

  • Assay duration

    Multiple steps standard assay
  • Species reactivity

    Reacts with: Rat
  • Product overview

    Abcam’s IL-1 beta Rat ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitative measurement of rat IL-1 beta in serum, plasma and cell culture supernatants.


    This assay employs an antibody specific for IL-1 beta coated on a 96-well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and IL- 1 beta present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti-rat IL-1 beta antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and colour develops in proportion to the amount of IL-1 beta bound. The Stop Solution changes the colour from blue to yellow, and the intensity of the colour is measured at 450 nm.

  • Tested applications

    Suitable for: Sandwich ELISAmore details
  • Platform

    Microplate

Properties

  • Storage instructions

    Store at -20°C. Please refer to protocols.
  • Components 1 x 96 tests
    200X HRP-Streptavidin Concentrate 1 x 200µl
    20X Wash Buffer Concentrate 1 x 25ml
    5X Assay Diluent B 1 x 15ml
    Assay Diluent A 1 x 30ml
    Biotinylated anti-rat IL-1 beta 2 vials
    IL-1 beta Microplate (12 x 8 wells) 1 unit
    Recombinant rat IL-1 beta Standard (lyophilized)  2 vials
    Stop Solution 1 x 8ml
    TMB One-Step Substrate Reagent 1 x 12ml
  • Research areas

  • Function

    Potent proinflammatory cytokine. Initially discovered as the major endogenous pyrogen, induces prostaglandin synthesis, neutrophil influx and activation, T-cell activation and cytokine production, B-cell activation and antibody production, and fibroblast proliferation and collagen production. Promotes Th17 differentiation of T-cells.
  • Tissue specificity

    Expressed in activated monocytes/macrophages (at protein level).
  • Sequence similarities

    Belongs to the IL-1 family.
  • Post-translational
    modifications

    Activation of the IL1B precursor involves a CASP1-catalyzed proteolytic cleavage. Processing and secretion are temporarily associated.
  • Cellular localization

    Cytoplasm, cytosol. Lysosome. Secreted, exosome. Cytoplasmic vesicle, autophagosome. Secreted. The precursor is cytosolic. In response to inflammasome-activating signals, such as ATP for NLRP3 inflammasome or bacterial flagellin for NLRC4 inflammasome, cleaved and secreted. IL1B lacks any known signal sequence and the pathway(s) of its secretion is(are) not yet fully understood (PubMed:24201029). On the basis of experimental results, several unconventional secretion mechanisms have been proposed. 1. Secretion via secretory lysosomes: a fraction of CASP1 and IL1B precursor may be incorporated, by a yet undefined mechanism, into secretory lysosomes that undergo Ca(2+)-dependent exocytosis with release of mature IL1B (PubMed:15192144). 2. Secretory autophagy: IL1B-containing autophagosomes may fuse with endosomes or multivesicular bodies (MVBs) and then merge with the plasma membrane releasing soluble IL1B or IL1B-containing exosomes (PubMed:24201029). However, autophagy impacts IL1B production at several levels and its role in secretion is still controversial. 3. Secretion via exosomes: ATP-activation of P2RX7 leads to the formation of MVBs containing exosomes with entrapped IL1B, CASP1 and other inflammasome components. These MVBs undergo exocytosis with the release of exosomes. The release of soluble IL1B occurs after the lysis of exosome membranes (By similarity). 4. Secretion by microvesicle shedding: activation of the ATP receptor P2RX7 may induce an immediate shedding of membrane-derived microvesicles containing IL1B and possibly inflammasome components. The cytokine is then released in the extracellular compartment after microvesicle lysis (PubMed:11728343). 5. Release by translocation through permeabilized plasma membrane. This may occur in cells undergoing pyroptosis due to sustained activation of the inflammasome (By similarity). These mechanisms may not be not mutually exclusive.
  • Information by UniProt
  • Alternative names

    • Catabolin
    • H1
    • IFN beta inducing factor
    • IL 1
    • IL 1 beta
    • IL-1 beta
    • IL1
    • IL1 BETA
    • IL1B
    • IL1B_HUMAN
    • IL1F2
    • Interleukin 1 beta
    • Interleukin 1 beta precursor
    • interleukin 1, beta
    • Interleukin-1 beta
    • OAF
    • Osteoclast activating factor
    • OTTHUMP00000162031
    • Preinterleukin 1 beta
    • Preinterleukin beta
    • Pro interleukin 1 beta
    see all
  • Database links

Applications

Our Abpromise guarantee covers the use of ab100767 in the following tested applications.

The application notes include recommended starting dilutions; optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

Application Abreviews Notes
Sandwich ELISA Use at an assay dependent concentration.

Images

  • Representative standard curve using ab100767

  • Representative standard curve using ab100767

Protocols

References

This product has been referenced in:

  • Kuwar R  et al. A novel small molecular NLRP3 inflammasome inhibitor alleviates neuroinflammatory response following traumatic brain injury. J Neuroinflammation 16:81 (2019). Read more (PubMed: 30975164) »
  • Sha H  et al. Rheinic acid ameliorates radiation-induced acute enteritis in rats through PPAR-?/NF-?B. Genes Genomics N/A:N/A (2019). Read more (PubMed: 31037524) »
See all 6 Publications for this product

Customer reviews and Q&As

1-5 of 5 Abreviews or Q&A

Question

Apreciada
Te adjunto más abajo en color rojo las respuestas a vuestros comentarios.
Un saludo
- Ambos kits se pidieron en Junio, si no se han utilizado hasta ahora es posible que haya habido degradación de los reactivos del mismo si no se ha almacenado a la temperatura adecuada. ¿Puedes confirmarme como se ha almacenado el kit, y el vial de estándar después de su reconstitución? ¿Estaba abierta la placa durante tiempo antes de utilizarse?
-Los kits se almacenaron a su llegada en la cámara fría a 4ºC. Las cajas no se desprecintaron hasta el día en que se realizó el kit. El estándar se reconstituyó en el momento de realizar el kit, por lo que no fue necesario almacenarlo. La placa estaba cerrada, ya que como he comentado anteriormente, el kit no se desprecintó hasta el momento de realizar el ensayo.
- Por el protocolo enviado entiendo que las muestras de suero no se diluyeron. Nosotros recomendamos una dilución mínima de 1/2 para muestras de suero o plasma. Si no se diluyen las muestras existe el riesgo de observar efecto matriz (este efecto ocurre cuando alguno de los compuestos de la muestra afectan a la immuno reactividad de la molécula target, enmascarando los sitios de unión). Algunos posibles causantes de ello son los anticuerpos propios, proteínas de unión, albumina etc… El resultado es que la muestra puede dar una lectura falsa, por encima o por debajo de los valores adecuados en un test ELISA, o incluso dar una respuesta no lineal.
Incluso en algunos casos algunas enfermedades contribuyen a crear el efecto matriz alterando las propiedades de la sangre. Este efecto es difícil de predecir y de solucionar.
Por ello no solemos recomendar usar muestras de plasma o suero sin diluir, para evitar este efecto. El factor de dilución mínimo recomendado es 1/2, incluso para la detección de citoquinas poco abundantes como IL1 beta e IL6.
-A pesar de que en los datos que os envié no se observa, las muestras de suero si estaban diluidas a 1/3.
-También sugeriría incubar el anticuerpo por más tiempo. Al menos 2.5 horas, pero lo ideal es dejarlo actuar durante la noche para incrementar la señal.
-Las muestras fueron incubadas durante toda la noche a 4ºC en agitación suave.
Si te parece y estás de acuerdo te propongo ensayar los cambios sugeridos y observar si la señal aumenta. En caso contrario, ya que ambos kits están cubiertos por la garantía Abpromise, se te reemplazarían los kits o reembolsaría el importe de los mismos.
-Debido a que se trataba de muestras de suero de ratas, disponíamos de muy poca muestra, por lo que actualmente nos es imposible volver a analizar las muestras. Por esta razón propongo que nos rembolséis el importe de los dos kits. En un futuro, cuando volvamos a generar muestras, adquiriremos nuevos kits.

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Answer

Perdona por la espera.
Es muy posible que el motivo de la baja absorbancia observada en las placas se deba a la perdida de actividad de alguno de los componentes del kit, debido a su degradación por haberse mantenido durante tantos meses a 4C.
Siempre recomendamos adquirir los productos, especialmente los kits de actividad, cuando vayan a utilizarse. Si se almacenan durante más de un mes es aconsejable mantenerlos a -20C para evitar posibles pérdidas de actividad.
La señal del estándar para el kit de IL6 es baja, sin embargo para el kit IL1beta los valores son aceptables. En este último caso el problema es quizás el background, que provoca la perdida de sensibilidad de la recta del estándar. Adjunto un par de documentos con algunos consejos para obtener señales intensas del estándar en las placas y para disminuir el grado de background.
De todas formas, el problema más común en experimentos de determinación de IL6 e IL1beta, no tiene que ver con el ensayo en sí, sino simplemente con los bajos valores de estas citoquinas.
En suero y plasma estas se encuentran en niveles bajos normalmente. Sin embargo, hay ciertos parámetros que deben mantenerse en estos ensayos para maximizar la probabilidad de que las muestras se encuentren dentro del rango detectable del ensayo:
- Incubar muestras y estándar durante la noche a 4C.
- Incrementar la cantidad de anticuerpo de detección (en 1,5. Demasiado incremento provocaría background)
-Incrementar la cantidad de HRP Streptavidina (de nuevo en 1,5 para evitar la aparición de background)
- Concentrar las muestras (usando, por ejemplo, una columna).
Se recomienda usar cada una de estas modificaciones por separado para evitar de nuevo la aparición de background.
De todas formas dado que ambos kits se encuentran en garantía si deseáis recibir un reembolso o reemplazo no dudes en comunicármelo.
Espero que esta información sea útil. Espero tu respuesta al respecto.

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Question
Answer

Gracias por mantenerte a la espera.
Después de discutir el caso con mis compañeros, hemos comentado lo siguiente:
- Ambos kits se pidieron en Junio, si no se han utilizado hasta ahora es posible que haya habido degradación de los reactivos del mismo si no se ha almacenado a la temperatura adecuada. ¿Puedes confirmarme como se ha almacenado el kit, y el vial de estándar después de su reconstitución? ¿Estaba abierta la placa durante tiempo antes de utilizarse?
- Por el protocolo enviado entiendo que las muestras de suero no se diluyeron. Nosotros recomendamos una dilución mínima de 1/2 para muestras de suero o plasma. Si no se diluyen las muestras existe el riesgo de observar efecto matriz (este efecto ocurre cuando alguno de los compuestos de la muestra afectan a la immuno reactividad de la molécula target, enmascarando los sitios de unión). Algunos posibles causantes de ello son los anticuerpos propios, proteínas de unión, albumina etc…
El resultado es que la muestra puede dar una lectura falsa, por encima o por debajo de los valores adecuados en un test ELISA, o incluso dar una respuesta no lineal.
Incluso en algunos casos algunas enfermedades contribuyen a crear el efecto matriz alterando las propiedades de la sangre. Este efecto es difícil de predecir y de solucionar.
Por ello no solemos recomendar usar muestras de plasma o suero sin diluir, para evitar este efecto. El factor de dilución mínimo recomendado es 1/2, incluso para la detección de citoquinas poco abundantes como IL1 beta e IL6.
-También sugeriría incubar el anticuerpo por más tiempo. Al menos 2.5 horas, pero lo ideal es dejarlo actuar durante la noche para incrementar la señal.
Si te parece y estás de acuerdo te propongo ensayar los cambios sugeridos y observar si la señal aumenta. En caso contrario, ya que ambos kits están cubiertos por la garantía Abpromise, se te reemplazarían los kits o reembolsaría el importe de los mismos.
Espero que esta información sea útil. No dudes en contactarme para cualquier comentario que puedas tener al respecto.

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Question
Answer

Thank you for contacting us. The host of the detection antibody is goat, and the host of the capture antibody is Armenian hamster. I hope this information is helpful to you. Please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.

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Answer

Thank you for your inquiry. I am happy to confirm that we guarantee our products for six month if stored correctly. ab100767 may be stored for up to 6 months at 2 to 8°C from the date of shipment. Standard (recombinant protein) should be stored at -20°C or -80°C (recommended at –80°C) after reconstitution. Opened Microplate Wells or reagents may be store for up to 1 month at 2 to 8°C. Return unused wells to the pouch containing desiccant pack, reseal along entire edge. Note: the kit can be used within one year if the whole kit is stored at -20°C. Avoid repeated freeze-thaw cycles. I hope this information is helpful. Please do not hesitate to contact me again with any further questions.

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Answer

Thank you for your enquiry. I can confirm that ab100767 IL1 beta Rat ELISA Kit would be the suitable kit to use with plasma samples. ab100768 IL1 beta Rat ELISA Kit is not designed for use with plasma samples. I hope this will be helpful to you. If you have any further questions, please do not hesitate to contact us.

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Please note: All products are "FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES"
For licensing inquiries, please contact partnerships@abcam.com

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