Anti-ST2 antibody - BSA free (ab25877)

For staining formalin-fixed, paraffin-embedded tissue with the ST2 antibody ab25877, we recommend a heat-mediated antigen retrieval with 10mM sodium citrate, pH 5.5, at 95-100C. The optimal time of incubation will need to be determined for your samples but 20 minutes is typically sufficient.

Merci d'avoir pris le temps de remplir notre questionnaire et de nous avoir contactés. Je suis désolée d'apprendre que vous avez eu des difficultés à obtenir de bons résultats avec ab25877

Notre politique est d'offrir tout d'abord la meilleure assistance technique. Si nous concluons que le produit que vous avez reçu ne fonctionne pas comme mentionné sur sa fiche technique et que ce produit a été commandé sous 120 jours, nous nous ferons un plaisir de vous offrir un remplacement gratuit ou un avoir en compensation.

En regardant vos résultats de western blot, je peux voir que la bande la plus importante est celle qui représente isoform B. Cette bande devrait être à 38.5 kDa mais semble légèrement décalé et apparait plus haut vers 40 kDa. Il me semble que toutes les bandes ont migré légèrement vers le haut ce qui expliquerait pourquoi la bande qui représente l'isoforme A apparaît à 70 kDa, un peut plus haut que prévue (64.8 kDa.)

Par contre c’est vrai que les deux bandes à 100 kDa et 130 kDa ne devraient pas y être. J'aimerais donc vous offrir quelques suggestions afin d'optimiser vos résultats.

Lors de la préparation de vos échantillons, je vous suggère d'augmenter le temps d'ébullition de 5 minutes à 10 minutes et d’utiliser un « sample buffer » frais. Ceci est pour éviter que des multimères se forme puisque la bande à 100 kDa pourrait correspondre à un dimère de l'isoforme B et la bande à 130 kDa pourrait correspondre à un dimère de l'isoforme A ou un trimère de l'isoforme B.
Essayez de changer l'agent bloquant à 5% BSA. Certains anticorps donnent des résultats plus spécifiques en utilisant de la BSA plutôt que de lait en tant qu’agent bloquant. Voir l’exemple d’un western blot pour Abcam anti-GAPDH (ab9385): https://www.abcam.com/ab9385.
Changer la concentration de l’anticorps. Notre fiche technique suggère d’utiliser une concentration de 1-2 ug/ml en Western blot. Je vous recommande donc d’utiliser une dilution de 1:1000 plutôt que 1 :300 pour réduire les bandes non-spécifiques.



J'espère que ces informations vous aideront. Si nos suggestions ne permettent pas d'améliorer vos résultats, n'hésitez pas à me recontacter pour plus d'assistance.

Je suis désolée d'apprendre qu’ab25877 ne vous donne pas de bons résultats en Western blot.

L’anticorps ab25877 devrait effectivement reconnaitre les 2 isoformes de la protéine à 38.5 kDa et 64.8 kDa ce qui expliquerait les bandes observées à 70 kDa et 40 kDa. J’ai fais des recherches de mon côté et je n’ai pas trouvé des explications pour les bandes à 100kDa et > 130kDa. Pour mieux comprendre ce cas, veuillez trouver ci-joint un questionnaire qui nous permettra de regrouper le plus d'informations possible sur le protocole que vous avez utilisé avec cet anticorps.
Celui-ci nous permettra de vous fournir la meilleure assistance technique.

Si nous concluons que notre produit est fautif et ne fonctionne pas comme explicité par notre fiche technique, nous serons ravis de mettre en place l'envoi d'un tube de remplacement gratuit ou d'un remboursement (sous réserve d'une commande ultérieure de 120 jours).

Je vous envoie aussi une référence où cet anticorps a été utilisé en Western blot chez la souris:

Cho KA et al. IL-33 induces Th17-mediated airway inflammation via mast cells in ovalbumin-challenged mice. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 302:L429-40 (2012).Read more (PubMed: 22180658)

Je vous remercie par avance de nous envoyer votre protocole.

Thank you for contacting us and your interest in our products.

We only have one antibody which has been tested (and would be covered by the Abpromise guarantee) for IHC. This is the rabbit polyclonal https://www.abcam.com/ST2-antibody-ab25877.html. This has been raised against an immunogen taken from the mouse protein. We have not tested this antibody with the human protein. However, the immunogen used shares 81% homology with the human protein. It is therefore possible that the antibody may be able to detect the human protein however, we would not be able to guarantee this.

Alternatively we have an antibody which has been used to detect the mouse and human protein in western blotting but we have not used it in IHC. This is the rabbit polyclonalhttps://www.abcam.com/ST2-antibody-ab72778.html. Again, as we have not tested this ourselves in IHC-P we cannot guarantee that it would work.

If you wanted to purchase either of these antibodies I would be able to offer you a testing discount. This offer means that if you test either ab25877 or ab72778in IHC staining with human samples and share the results with us through an Abreview (no matter whether positive or negative) you would be eligible for a free primary antibody of your choice from our catalogue (or the equivalent price off any product in our catalogue). More information on this offer can be found here:

https://www.abcam.com/collaboratordiscount

The only constraint to this offer is that the antibody to be tested must be purchased, tested, the Abreview submitted and the free primary antibody claimed within a 4 month period.

Both ab25877 and ab72778is provided at a price of €370 for 100 ug with a shipping cost of €21 to Germany.

I hope this information has been of help. If you require any further information, please do not hesitate to call.