Overview

  • Product name
    Anti-TRF2 antibody [4A794] - ChIP Grade
    See all TRF2 primary antibodies
  • Description
    Mouse monoclonal [4A794] to TRF2 - ChIP Grade
  • Host species
    Mouse
  • Tested applications
    Suitable for: IHC-P, WB, ICC, IP, ChIP, ICC/IF, Flow Cytmore details
  • Species reactivity
    Reacts with: Mouse, Rat, Human, Indian muntjac
  • Immunogen

    Baculovirus expressing full length TRF2 protein.

  • Positive control
    • Jurkat cell lysate (WB)

Properties

Applications

Our Abpromise guarantee covers the use of ab13579 in the following tested applications.

The application notes include recommended starting dilutions; optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

Application Abreviews Notes
IHC-P Use a concentration of 1 µg/ml.
WB Use a concentration of 4 µg/ml. Detects a band of approximately 66 kDa.
ICC Use at an assay dependent concentration.
IP Use 2µg for 106 cells.
ChIP Use at an assay dependent concentration.
ICC/IF Use at an assay dependent concentration. PubMed: 20679250
Flow Cyt Use 1µg for 106 cells.

ab170190 - Mouse monoclonal IgG1, is suitable for use as an isotype control with this antibody.

Target

  • Function
    Binds the telomeric double-stranded 5'-TTAGGG-3' repeat and plays a central role in telomere maintenance and protection against end-to-end fusion of chromosomes. In addition to its telomeric DNA-binding role, required to recruit a number of factors and enzymes required for telomere protection, including the shelterin complex, TERF2IP/RAP1 and DCLRE1B/Apollo. Component of the shelterin complex (telosome) that is involved in the regulation of telomere length and protection. Shelterin associates with arrays of double-stranded 5'-TTAGGG-3' repeats added by telomerase and protects chromosome ends; without its protective activity, telomeres are no longer hidden from the DNA damage surveillance and chromosome ends are inappropriately processed by DNA repair pathways. Together with DCLRE1B/Apollo, plays a key role in telomeric loop (T loop) formation by generating 3' single-stranded overhang at the leading end telomeres: T loops have been proposed to protect chromosome ends from degradation and repair. Required both to recruit DCLRE1B/Apollo to telomeres and activate the exonuclease activity of DCLRE1B/Apollo. Preferentially binds to positive supercoiled DNA. Together with DCLRE1B/Apollo, required to control the amount of DNA topoisomerase (TOP1, TOP2A and TOP2B) needed for telomere replication during fork passage and prevent aberrant telomere topology. Recruits TERF2IP/RAP1 to telomeres, thereby participating in to repressing homology-directed repair (HDR), which can affect telomere length.
  • Tissue specificity
    Ubiquitous. Highly expressed in spleen, thymus, prostate, uterus, testis, small intestine, colon and peripheral blood leukocytes.
  • Sequence similarities
    Contains 1 HTH myb-type DNA-binding domain.
  • Domain
    The TRFH dimerization region mediates the interaction with DCLRE1B/Apollo but not TINF2.
  • Post-translational
    modifications
    Phosphorylated upon DNA damage, probably by ATM or ATR.
  • Cellular localization
    Nucleus. Chromosome > telomere. Colocalizes with telomeric DNA in interphase cells and is located at chromosome ends during metaphase.
  • Information by UniProt
  • Database links
  • Alternative names
    • Telomeric DNA binding protein antibody
    • Telomeric DNA-binding protein antibody
    • Telomeric repeat binding factor 2 antibody
    • Telomeric repeat binding protein 2 antibody
    • Telomeric repeat-binding factor 2 antibody
    • TERF 2 antibody
    • Terf2 antibody
    • TERF2_HUMAN antibody
    • TRBF 2 antibody
    • TRBF2 antibody
    • TRF 2 antibody
    • TRF2 antibody
    • TTAGGG repeat binding factor 2 antibody
    • TTAGGG repeat-binding factor 2 antibody
    see all

Images

  • ab13579 staining TRF2 in HeLa cells by Immunocytochemistry/ Immunofluorescence.
    The cells were washed in PBS, fixed for 15 minutes at room temperature in 4% formaldehyde in PBS, and then washed for 5 minutes with PBS. The cells were then dehydrated with cold methanol at room temperature for 10 minutes, washed, and blocked with blocking solution (3% skim milk, 0.05% Tween-20 in PBS) at room temperature for 1 hour. ab13579 added at 2 µg/ml at 37?°C for 1 hour. After washing three times, 5 µg/mL fluorescein (TRITC) goat anti-mouse (Abcam) as the secondary antibody in blocking solution was added and incubated at room temperature for 1 hour.
  • ab13579 staining TRF2 in bladder carcinoma cells using Immunohistochemistry (Formalin/PFA-fixed paraffin-embedded sections). Antigeen retrieval carried out by heat treatment in Citrate buffer pH6.0. Primary antibody diluted to 4μg/ml.

  • Immunoprecipitation / Western Blot analysis of TRF2 in HL60 cells. 1. IP with ab13579.  2. IP with control mouse IgG. TRF2 is detected as an ~ 66 kD protein.

    Immunoprecipitation / Western Blot analysis of TRF2 in HL60 cells. 1. IP with ab13579. 2. IP with control mouse IgG. TRF2 is detected as an ~ 66 kD protein.
  • ab13579 (1µg/ml) staining TRF2 in human spleen, using an automated system (DAKO Autostainer Plus). Using this protocol there is strong nuclear staining in the germinal follicle.
    Sections were rehydrated and antigen retrieved with the Dako 3 in 1 AR buffer EDTA pH 9.0 in a DAKO PT link. Slides were peroxidase blocked in 3% H2O2 in methanol for 10 mins. They were then blocked with Dako Protein block for 10 minutes (containing casein 0.25% in PBS) then incubated with primary antibody for 20 min and detected with Dako envision flex amplification kit for 30 minutes. Colorimetric detection was completed with Diaminobenzidine for 5 minutes. Slides were counterstained with Haematoxylin and coverslipped under DePeX. Please note that, for manual staining, optimization of primary antibody concentration and incubation time is recommended. Signal amplification may be required.
  • Overlay histogram showing HeLA cells stained with ab13579 (red line). The cells were fixed with 100% methanol (5 min) and then permeabilized with 0.1% PBS-Tween for 20 min. The cells were then incubated in 1x PBS / 10% normal goat serum / 0.3M glycine to block non-specific protein-protein interactions followed by the antibody (ab13579, 1µg/1x106 cells) for 30 min at 22°C. The secondary antibody used was DyLight® 488 goat anti-mouse IgG (H+L) (ab96879) at 1/500 dilution for 30 min at 22°C. Isotype control antibody (black line) was Mouse IgG1 [ICIGG1] (ab91353, 2µg/1x106 cells) used under the same conditions. Acquisition of >5,000 events was performed.

References

This product has been referenced in:
  • Ling X  et al. TERT regulates telomere-related senescence and apoptosis through DNA damage response in male germ cells exposed to BPDE in vitro and to B[a]P in vivo. Environ Pollut 235:836-849 (2018). Mouse . Read more (PubMed: 29353801) »
  • Yuan F  et al. Nucleolar TRF2 attenuated nucleolus stress-induced HCC cell-cycle arrest by altering rRNA synthesis. Cell Death Dis 9:518 (2018). Read more (PubMed: 29725012) »
See all 25 Publications for this product

Customer reviews and Q&As

1-9 of 9 Abreviews or Q&A

Answer

I have heard back from the lab regarding the antibodies ab13579, ab14402 & ab111118:


Ab13579 : Full-length recombinant human TRF2 protein was used as immunogen to generate the antibody.


We have not mapped the epitope that the IMG-124A TRF2 antibody recognizes. However, it has been reported to recognizes TRF2 forms with N-terminal and C-terminal truncations. I have attached a representative publication (EJ Cancer, 42:1881-1888, 2006) showing this by WB please see Fig 2. There are other publications as well citing the antibody for truncated TRF2 and TRF2 with certain mutations.



Ab14402: epitope not mapped


Ab111118: The immunogenic peptide used is located between aa 150 and 200 of NP_005643.1.

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Answer

Thank you for your reply.


We would be thankfull if you could fill out the attached questionnaire, so we can get the key facts about your protocol to further analyze this failure.

As requested, I have issued a free of charge replacement with the order number 123456789.

To check the status of the order please contact our Customer Service team and reference this number.

Please note that this free of charge replacement vial is also covered by our Abpromise guarantee. Should you still be experiencing difficulties, or if you have any further questions, please do not hesitate to let us know.

I wish you the best of luck with your research.

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Question

3) Description du problème   Marquage non spécifique et bruit de fond très important 4 Préparation de l’échantillon : Espèce    coupes histologiques de peau humaine      Type d’échantillon : sections fraîches congelées, sections congelées fixées par perfusion, sections PFA/formaline fixée paraffine, culture cellulaire, autre :  sections congelée (frozen) Préparation de l’échantillon Contrôle positif  aucun Contrôle négatif  aucun 5) Etape de fixation : oui Si oui :  acetone Temps de fixation 10 minutes Température de fixation fixation avec acetone froid  (préalablement placé à -20°C)   6) Méthode pour l’antigen retrieval  aucun   7) Etape de perméabilisation : Avez-vous procéder à une étape de permabilisation (à détailler) ou avez-vous additionné un agent de perméabilisation dans plusieurs tampons de dilution ?  Non Agent de perméabilisation et concentration  aucun   8) Agent bloquant (ex BSA, serum…):  Concentration   BSA 5% + goat serum 1% Temps de saturation       30 minutes                            Température de saturation   room temperature   9) Blocage des peroxidases endogènes ?  non Blocage des biotines endogènes ?  non   10) Anticorps primaire (utilisation de plusieurs anticorps, description dans “notes supplémentaires”) : Concentration et dilution    1/100 Tampon de dilution  PBS 1X Temps d’incubation   1h30   11)  Anticorps secondaire :       alexa fluor 488 Espèce  donkey           Réagit contre  anti mouse Concentration ou dilution  1/1000 Tampon de dilution  PBS 1X Temps d’incubation  1h Température d’incubation  room temperature Fluorochrome or enzyme conjuguée   12) Lavage après les anticorps primaire et secondaire : Tampon  PBS 1X Nombre de lavage  1 fois 30 minutes après Ac primaire  /  1 fois 15 minutes après Ac secondaire   13) Méthode de détection : microscope fluorescence   14) Combien de fois avez vous essayer cette application ? 3 fois sans succés Obtenez-vous toujours le même résultat ? oui Quelle étape avez vous optimisée ? aucune car le protocole utilisé fonctionnait très bien jusqu’à présent

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Answer

Selon nos informations vous avez connu quelques difficultés avec ab13579 et avez contacté notre service scientifique.

Nous vous avions donné des suggéstions pour améliorer les résultats. Je vous écris maintenant pour savoir si ces suggéstions ont permis de résoudre le problème? Je serais ravis d'avoir de vos nouvelles. Je tiens aussi à vous rappeler que nous avons une garantie sur nos produits, et, dans le cas que nous arrivons pas à résoudre le problème, nous vous remplacons le produit s'il était utilisé comme décrit sur la fiche technique.

Je me réjouis de votre réponse.

Voici les suggéstions que nous vous avions donné auparavant:

Merci d'avoir pris le temps de remplir notre questionnaire et de nous avoir contactés. Je suis désolée que vous avez eu des difficultés à obtenir de bons résultats avec ab13579.

Comme déjà expliqué, notre politique est d'offrir tout d'abord la meilleure assistance technique. Si nous concluons que le produit que vous avez reçu ne fonctionne pas comme mentionné sur sa fiche technique et que ce produit a été commandé sous 180 jours, nous nous ferons un plaisir de vous offrir un remplacement gratuit ou un avoir en compensation.

J'aimerais vous offrir quelques suggestions afin d'optimiser vos résultats. J'apprécierais si vous pouviez confirmer quelques détails de la procédure.

1.) Effectivement nous n'avons pas testé cet anticorps sur des coupes congelées. Nous ne savons donc pas si et dans quelles conditions cet anticorps fonctionne sur des coupes congelées. Je peux vous conseiller d'optimiser le marquage avec cet anticorps. Comme optimisation plus importante, je vous conseille de tester des fixations différents en incluant le méthanol et la paraformaldéhyde en parallèle de l'acétone. La fixation avec la paraformaldéhyde se fait par crosslinking pendant que la fixation avec Acétone/Méthanol se fait par précipitation des protéines. Ce peux évidement avoir des différents résultats sur l'accessibilité de l'epitope et est donc différent pour chaque anticorps.
Dans l'article http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2930462/?tool=pubmed les cellules étaient fixées avec la paraformaldéhyde par exemple.

2.) Je peux vous conseiller de tester aussi des différents dilutions de l'anticorps - comme 1/100, 1/200, 1/500 et 1/1000. Trop d'anticorps peux précipiter sur la coupe et produire aussi du bruit de fond.

3.) Est-ce que vous pouvez confirmer que sans l'anticorps primaire, donc seulement avec l'anticorps secondaire, vous n'avez pas de bruit de fond?

En générale, nous recommandons aussi de faire plutôt plusieurs lavages courtes entre les marquage, car ceci va enlever plus du produit - comme 3 lavages de 10 minutes.

J'espère que ces informations vous aideront. Si nos suggestions ne permettent pas d'améliorer vos résultats, n'hésitez pas à me recontacter pour plus d'assistance.

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Answer

Thank you for your enquiry.

ab96876 is a Donkey polyclonal anti mouse IgG secondary, and should therefore detect ab13579TRF2 antibody [4A794]which is a mouse IgG1 primary.

As stated on the datasheet, ab96876 has been tested in IHC-P, ICC/IF, Flow Cyt, and WB.

It is therefore tested and guaranteed for western blot and immunohistochemistry on paraffin embedded sections. I am sorry I am not sure what you mean by IHC both FL - Non FL, could you clarify?

I hope this will be helpful. Please do not hesitate to contact me if you have any further questions.

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Question

xx
3) Description du problème Marquage non spécifique et bruit de fond très important

4 Préparation de l’échantillon :
Espèce coupes histologiques de peau humaine
Type d’échantillon : sections fraîches congelées, sections congelées fixées par perfusion, sections PFA/formaline fixée paraffine, culture cellulaire, autre : sections congelée (frozen)
Préparation de l’échantillon
Contrôle positif aucun
Contrôle négatif aucun

5) Etape de fixation : oui
Si oui : acetone
Temps de fixation 10 minutes
Température de fixation fixation avec acetone froid (préalablement placé à -20°C)

6) Méthode pour l’antigen retrieval aucun

7) Etape de perméabilisation :
Avez-vous procéder à une étape de permabilisation (à détailler) ou avez-vous additionné un agent de perméabilisation dans plusieurs tampons de dilution ? Non
Agent de perméabilisation et concentration aucun

8) Agent bloquant (ex BSA, serum…):
Concentration BSA 5% + goat serum 1%
Temps de saturation 30 minutes
Température de saturation room temperature

9) Blocage des peroxidases endogènes ? non
Blocage des biotines endogènes ? non

10) Anticorps primaire (utilisation de plusieurs anticorps, description dans “notes supplémentaires”) :
Concentration et dilution 1/100
Tampon de dilution PBS 1X
Temps d’incubation 1h30

11) Anticorps secondaire : alexa fluor 488
Espèce donkey
Réagit contre anti mouse
Concentration ou dilution 1/1000
Tampon de dilution PBS 1X
Temps d’incubation 1h
Température d’incubation room temperature
Fluorochrome or enzyme conjuguée

12) Lavage après les anticorps primaire et secondaire :
Tampon PBS 1X
Nombre de lavage 1 fois 30 minutes après Ac primaire / 1 fois 15 minutes après Ac secondaire

13) Méthode de détection : microscope fluorescence

14) Combien de fois avez vous essayer cette application ? 3 fois sans succés
Obtenez-vous toujours le même résultat ? oui
Quelle étape avez vous optimisée ? aucune car le protocole utilisé fonctionnait très bien jusqu’à présent



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Answer

Merci d'avoir pris le temps de remplir notre questionnaire et de nous avoir contactés. Je suis désolée que vous avez eu des difficultés à obtenir de bons résultats avec ab13579.

Comme déjà expliqué, notre politique est d'offrir tout d'abord la meilleure assistance technique. Si nous concluons que le produit que vous avez reçu ne fonctionne pas comme mentionné sur sa fiche technique et que ce produit a été commandé sous 180 jours, nous nous ferons un plaisir de vous offrir un remplacement gratuit ou un avoir en compensation.

J'aimerais vous offrir quelques suggestions afin d'optimiser vos résultats. J'apprécierais si vous pouviez confirmer quelques détails de la procédure.
1.) Effectivement nous n'avons pas testé cet anticorps sur des coupes congelées. Nous ne savons donc pas si et dans quelles conditions cet anticorps fonctionne sur des coupes congelées. Je peux vous conseiller d'optimiser le marquage avec cet anticorps. Comme optimisation plus importante, je vous conseille de tester des fixations différents en incluant le méthanol et la paraformaldéhyde en parallèle de l'acétone. La fixation avec la paraformaldéhyde se fait par crosslinking pendant que la fixation avec Acétone/Méthanol se fait par précipitation des protéines. Ce peux évidement avoir des différents résultats sur l'accessibilité de l'epitope et est donc différent pour chaque anticorps.
Dans l'article http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2930462/?tool=pubmed les cellules étaient fixées avec la paraformaldéhyde par exemple.
2.) Je peux vous conseiller de tester aussi des différents dilutions de l'anticorps - comme 1/100, 1/200, 1/500 et 1/1000. Trop d'anticorps peux précipiter sur la coupe et produire aussi du bruit de fond.
3.) Est-ce que vous pouvez confirmer que sans l'anticorps primaire, donc seulement avec l'anticorps secondaire, vous n'avez pas de bruit de fond?
En générale, nous recommandons aussi de faire plutôt plusieurs lavages courtes entre les marquage, car ceci va enlever plus du produit - comme 3 lavages de 10 minutes.
J'espère que ces informations vous aideront. Si nos suggestions ne permettent pas d'améliorer vos résultats, n'hésitez pas à me recontacter pour plus d'assistance.

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Answer

Je suis désolée d'apprendre que ab13579 ne vous donne pas de bons résultats en immunohistochimie. Nous n'avons pas eu des autres retours négatives sur ce lot ou sur cet anticorps. J'aimerai bien investiguer le problème que vous avez rencontré un peu plus, pour voir si nous pouvons éventuellement donner des suggestions au protocole ou si le tube que vous avez reçu était endommagé. Si le tube est endommagé, nous allions le remplacer.
Veuillez trouver ci-joint un questionnaire qui nous permet de regrouper le plus d'informations possible sur le protocole que vous avez utilisé avec cet anticorps. Celui-ci ne devrais pas vous prendre plus que 5 minutes à remplir et nous permettra d'analyser mieux le problème. Veuillez attacher aussi une image du résultat si vous en avez un. Je vous remercie de votre coopération.

Si nous concluons que notre produit est fautif et ne fonctionne pas comme explicité par notre fiche technique, nous serons ravis de mettre en place l'envoi d'un tube de remplacement gratuit ou d'un remboursement (sous réserve d'une commande ultérieure de 180 jours).

Je vous remercie par avance de nous envoyer votre protocole.

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Abcam guarantees this product to work in the species/application used in this Abreview.
Application
Western blot
Sample
Human Cell lysate - whole cell (Jurkat cells)
Loading amount
200000 cells
Specification
Jurkat cells
Gel Running Conditions
Reduced Denaturing
Blocking step
Milk as blocking agent for 1 hour(s) and 0 minute(s) · Concentration: 5% · Temperature: 20°C

Abcam user community

Verified customer

Submitted Nov 25 2009

Answer

Thank you for your enquiry and your patience. There is no explanation for a band only observed at 70 kDa and we have not observed this band previously. I contacted the originator of the antibody and they have also not observed this band. Could you please fill out the questionnaire at the following link so that might be able to better assist you? https://www.abcam.com/index.html?section=western&pageconfig=technical&intAbID=10579&mode=questionaire Can you also send me a picture of your blot? An image and a protocol could be very helpful. I look forward to your reply.

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Answer

I'm sorry to hear you are having a problem with ab10579. Could you please fill out the form at the following link as we discussed on the phone? https://www.abcam.com/index.html?section=western&pageconfig=technical&intAbID=10579&mode=questionaire I look forward to hearing from you. In the meantime I will look into an explanation for the 70 kDa band.

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Please note: All products are "FOR RESEARCH USE ONLY AND ARE NOT INTENDED FOR DIAGNOSTIC OR THERAPEUTIC USE"

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